[发明专利]一种桃仁配方颗粒中D-苦杏仁苷的含量测定方法

说明书

本发明公开了一种桃仁配方颗粒中D‑苦杏仁苷的含量测定方法，包括色谱条件与系统适应性试验、对照品溶液的制备、供试品溶液制备、测定法等步骤。本发明通过优化色谱条件及供试品的制备方法，采用UPLC法能从根本分离苦杏仁苷两种手性化合物，将D‑苦杏仁苷与L‑苦杏仁苷分离后再测定D‑苦杏仁苷的含量，大大增强了含量测定的准确性。

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种桃仁配方颗粒中D-苦杏仁苷的含量测定方法。

背景技术

桃仁为蔷薇科植物桃Prunus persica(L.)Batsch或山桃Prunus davidiana(Carr.)Franch.的干燥成熟种子，收载于2015版《中国药典》，具有活血祛瘀，润肠通便，止咳平喘功效，用于经闭痛经，癥瘕痞块，肺痈肠痈，跌扑损伤，肠燥便秘，咳嗽气喘。现代研究表明，桃仁的主要有效成分之一为苦杏仁苷，是《中国药典》质量控制的指标化合物，具有止咳平喘、抗动脉粥样硬化、抗氧诱导性肺损伤、抗炎、抗肿瘤及免疫调节等药理作用。

桃仁配方颗粒是由单味中药饮片经水提、浓缩、干燥、制粒而成，在中医临床配方后，供患者冲服使用。苦杏仁苷具有L-苦杏仁苷和D-苦杏仁苷2种构型，一般情况下，以D-苦杏仁苷的形式存在于桃仁中，为镇咳、平喘的主要药效成分，通常所述的苦杏仁苷是指D-苦杏仁苷。据有关研究表明，苦杏仁苷的热稳定性较差，在高温煎煮条件下，苦杏仁苷易产生异构化，具体表现为D-苦杏仁苷随着水温的上升而异构化产生L-苦杏仁苷。目前文献及《广东省中药配方颗粒标准》(第一册)多报道桃仁配方颗粒中苦杏仁苷含量测定采用中国药典2015年一部桃仁药材苦杏仁苷含量测定的HPLC方法，该方法色谱图显示的苦杏仁苷为单一峰(如图1)，色谱峰里面包含了2种苦杏仁苷(D型与L型)，也就是说D-苦杏仁苷和L-苦杏仁苷不能很好的分离，而中国食品药品检定研究院所提供是法定对照品属D-苦杏仁苷，因此，采用HPLC方法势必会存在D-苦杏仁苷含量测定的不准确性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种桃仁配方颗粒中D-苦杏仁苷的含量测定方法，该方法能从根本分离苦杏仁苷两种手性化合物，确保含量测定的准确性。

本发明是通过以下技术方案实现：

一种桃仁配方颗粒中D-苦杏仁苷的含量测定方法，包括以下步骤：

(1)色谱条件与系统适应性试验：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.1％磷酸溶液为流动相B，按下表规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.4ml；柱温为20℃；检测波长为210nm；理论板数按苦杏仁苷峰计算应不低于25000；

(2)对照品溶液的制备：取D-苦杏仁苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；

(3)供试品溶液制备：取桃仁配方颗粒，研细，取0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60-80％甲醇50ml，称定重量，超声处理15-45分钟，放冷，再称定重量，用60-80％甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本发明对供试品溶液的制备条件进行了优化，对不同提取溶剂、不同提取方式、不同提取时间及不同料液比进行考察，进一步优选的，所述供试品溶液制备，具体为：取桃仁配方颗粒，研细，取0.1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入70％甲醇50mL，称定重量，超声处理30分钟，功率为250W，频率为40KHz，取出，放冷，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.22μm滤膜滤过，即得。