[发明专利]一种利用UPLC特征图谱鉴别百部药材基源的方法

权利要求书

1.一种利用UPLC特征图谱鉴别百部药材基源的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(a) 供试品溶液的制备：

分别取对叶百部药材和直立百部药材，研细，取0.25g，精密称定，置10ml量瓶中，加入50-100%甲醇适量，超声处理10-30分钟，取出，放冷，用50-100%甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，即得；

(b) 参照物溶液的制备：

取绿原酸对照品适量，加80%甲醇制成每1ml含绿原酸20µg，即得；分别再取对叶百部对照药材、直立百部对照药材0.5g，精密称定，置20ml量瓶中，加入80%甲醇适量，超声处理30min，取出，放冷，用80%甲醇定容至刻度，摇匀，用0.22um滤膜滤过，即得；

(c) 色谱条件与系统适用性试验：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸为流动相B，按下表进行梯度洗脱；流速：0.25ml/min；柱温为25℃；检测波长为210nm；

（d）特征图谱的建立：

分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各1µl，注入超高效液相色谱仪，测定，采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”匹配，建立对叶百部药材和直立百部药材的特征图谱；

（e）鉴别依据：

将对叶百部药材和直立百部药材的特征图谱进行比较，对叶百部药材中确定具有8个特征峰，以峰3绿原酸峰为参照峰S峰，各特征峰的相对保留时间分别为：峰1：0.82、峰2：0.95、峰3：1.00、峰4：1.04、峰5：1.18、峰6：1.48、峰7：1.52、峰8：1.67，相对保留时间在规定值的±10%之内；直立百部药材中确定具有6个色谱峰，与对叶百部药材相比，缺少峰1和峰2，将峰1和峰2作为鉴别百部药材基源的依据；

（f）鉴别：

将待测百部样品与对叶百部与直立百部药材的特征图谱进行比较，确定百部药材基源；若待测百部样品色谱中具有峰1和锋2，则为对叶百部；若无峰1和锋2，则为直立百部；

（g）峰1和峰2的指认：采用UPLC-Q-TOF/MS方法进行测定，

其中，液相条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：A：0.1%磷酸；B：乙腈；柱温：30 °C；样品室温度：10 °C；流速：0.30mL/min；进样体积：2μL，负离子模式；流动相流动梯度见下表：

质谱条件：氮气作为质谱离子源的雾化、锥孔气；电喷雾电离负离子模式；毛细管电压：2.5 KV；锥孔电压：40 V；萃取锥孔电压：3 V；离子源温度：100 °C；脱溶剂气温度：350°C；反向锥孔气流：50 L/h；脱溶剂气流速：600 L/h；碰撞气流速：0.5mL/min；扫描时间：0.5s；扫描时间间隔：0.02 s；质荷比范围：50–1200 m/z；

所述峰1的归属为新绿原酸，峰2的归属为3-阿魏酰奎宁酸；

（h）绿原酸的含量测定：采用超高液相色谱仪测定，其中，供试品溶液的制备为：

取百部药材，研细，取粉末0.25g，精密称定，置10ml量瓶中，加入70%乙醇，超声处理10分钟，取出，放冷，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

色谱条件为：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；柱温为25℃以下；流速为0.25ml/min；检测波长为325nm；理论塔板数按绿原酸计算应不低于10000；

时间/分钟	流动相A%	流动相B%
0～15	1→10	99→90
15～20	10→40	90→60
20～22	40→90	60→10
22～24	90	10
24～25	90→1	10→99
25～28	1	99

。

2.根据权利要求1所述的一种利用UPLC特征图谱鉴别百部药材基源的方法，其特征在于，步骤(a) 供试品溶液的制备：分别取对叶百部药材和直立百部药材，研细，取0.25g，精密称定，置10ml量瓶中，加入80%甲醇适量，超声处理10分钟，取出，放冷，用80%甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，即得。