[发明专利]基于金属螯合物拉曼标签技术检测组织液中组胺的方法

说明书

本发明公开了一种基于金属螯合物拉曼标签技术检测组织液中组胺的方法，包括以下步骤：取有机配体与二价镍盐进行配位反应，得到金属螯合物溶液；将金属螯合物溶液涂覆在表面带负电荷的表面增强拉曼基底的表面，干燥后得到功能化基底；将与水互溶的醇与组织液混合均匀，离心，取上层清液；向上层清液中加入酸性溶液，混合均匀后加入有机溶剂，混合均匀后离心，取水相溶液；将水相溶液涂覆在功能化基底上，利用拉曼光谱仪进行检测。本发明提出的基于金属螯合物拉曼标签技术检测组织液中组胺的方法，其步骤简单，对组胺的SERS检测灵敏度、稳定性和重复性好。

技术领域

本发明涉及检测技术领域，尤其涉及一种基于金属螯合物拉曼标签技术检测组织液中组胺的方法。

背景技术

组胺是自体活性物质之一，主要存储于人体中的肥大细胞和嗜碱性粒细胞中。当人体受到过敏原刺激时，会释放组胺，引起血管扩张，导致水肿、血压降低，产生各种相应的症状，损害身体健康。作为速发型超敏反应的炎性介质，当血液中的组胺达到一定水平时，将产生过敏性休克甚至死亡。组胺是过敏性疾病药物治疗的一个很好的靶分子，也是过敏性疾病确诊的一项辅助性指标。因此，发展快速、简单、特异性好、灵敏度高的组胺检测方法，成为过敏反应早期诊断或防治的迫切需求。

1974年，Fleischmann等人对银电极表面用电化学方法进行粗糙化处理后，用拉曼光谱仪对其进行表征时获得了吸附在粗糙银电极表面吡啶分子的高质量拉曼光谱图。1977年，VanDuyne等人对这一现象进行了分析，指出这是一种与粗糙化的表面存在某种必然关系的增强效应，这种效应之后被称为表面增强拉曼散射(Surface-enhanced RamanScattering，SERS)效应。SERS自发现以来因其高灵敏性、无损伤、指纹特征、检测速度快等优势，常被作为一种灵敏的分子指纹识别的光谱工具。

由于常见的过敏反应炎性介质检测方法一般检测成本高、耗时长、需要专业的人员，SERS技术检测可以弥补上述方法的不足。组胺等小分子标志物，通常在血液或组织液中含量极低，且血液或组织液中还有大量其他的生物干扰成分。同时拉曼散射截面小，直接用SERS检测很难满足实际检测需求。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种基于金属螯合物拉曼标签技术检测组织液中组胺的方法，其步骤简单，对组胺的SERS检测灵敏度、稳定性和重复性好。

本发明提出的一种基于金属螯合物拉曼标签技术检测组织液中组胺的方法，包括以下步骤：

S1、取有机配体与二价镍盐进行配位反应，得到金属螯合物溶液；

S2、将金属螯合物溶液涂覆在表面带负电荷的表面增强拉曼基底的表面，干燥后得到功能化基底；

S3、将与水互溶的醇与组织液混合均匀，离心，取上层清液；

S4、向S3中的上层清液中加入酸性溶液，混合均匀后加入有机溶剂，混合均匀后离心，取水相溶液；

S5、将S4中的水相溶液涂覆在S2中的功能化基底上，利用拉曼光谱仪进行检测。

优选地，S1的具体步骤为：将有机配体与二价镍盐溶液混合，调节pH值为5-7，搅拌后得到金属螯合物溶液。

优选地，在S1中，所述有机配体为单齿有机配体或者多齿有机配体。

优选地，所述有机配体为柠檬酸、乙二胺四乙酸、氨基三乙酸、吡啶中的一种。

优选地，在S1中，所述二价镍盐为溶于水的二价镍盐。

优选地，所述二价镍盐为六水硝酸镍、醋酸镍、氯化镍中的一种或者多种的混合物。

优选地，在S2中，将金属螯合物溶液滴在表面带负电荷的表面增强拉曼基底的表面，干燥后得到功能化基底。