[发明专利]一种电荷遮蔽的还原环境响应性基因载体及其制备方法

权利要求书

1.一种基因载体的制备方法，其特征在于，所述基因载体包括多糖、阳离子聚合物、基因和交联剂；所述多糖为电中性或电负性的水溶性多糖，所述电中性或电负性水溶性多糖与所述阳离子聚合物构成多糖基接枝交联聚合物，所述多糖基接枝交联聚合物与所述基因通过静电作用形成基因载体，所述基因负载于基因载体内部，所述电中性或电负性水溶性多糖位于基因载体表面；包括以下步骤：

（1）制备电中性或电负性水溶性多糖的水溶液，惰性气体保护下加入引发剂，搅拌混匀；所述电中性或电负性水溶性多糖为葡聚糖、海藻酸、水溶性淀粉、羧甲基葡聚糖、羧甲基纤维素、透明质酸、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素和普鲁兰多糖中的一种或多种；所述引发剂为硝酸铈铵；

（2）加入阳离子单体或溶于溶剂的阳离子单体，搅拌混匀；所述阳离子单体为甲基丙烯酸二乙氨基乙酯、甲基丙烯酸二乙基氨基乙酯、甲基丙烯酸二甲氨乙酯、丙烯酸二甲氨基乙酯、丙烯酸N,N-二乙基氨基乙酯、2-甲基-2-丙烯酸2-(4-吗啉基)乙基酯、丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵、甲基丙烯酸 2-氨基乙基酯盐酸盐和甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵中的一种或多种；

（3）加入还原环境敏感的交联剂，惰性气体保护下进行聚合及交联反应；所述还原环境敏感的交联剂为二烯丙基二硫、L-胱氨酸双丙烯酰胺、双丙烯酰胱胺或双（2-甲基丙烯酰氧基乙基）二硫醚中的一种或多种；

（4）透析处理，冷冻干燥得到接枝交联聚合物；

（5）得到的接枝交联聚合物与基因混合，通过静电作用力形成静电凝聚体，即基因载体；所述基因为质粒、siRNA、microRNA、piRNA、circleRNA和lncRNA中的一种或多种。

2.如权利要求1所述的方法制备的基因载体，其特征在于，所述基因载体包括多糖、阳离子聚合物、基因和交联剂；所述多糖为电中性或电负性的水溶性多糖，所述电中性或电负性水溶性多糖与所述阳离子聚合物构成多糖基接枝交联聚合物，所述多糖基接枝交联聚合物与所述基因通过静电作用形成基因载体，所述基因负载于基因载体内部，所述电中性或电负性水溶性多糖位于基因载体表面；所述交联剂具有还原环境响应性的二硫键；含所述二硫键双官能团交联剂在所述阳离子聚合物的接枝链上共聚；所述基因载体为多层级结构，包括内核结构和外壳结构，所述内核结构为所述基因与所述阳离子聚合物接枝链形成静电凝聚体，所述外壳结构为所述电中性或电负性的水溶性多糖在所述凝聚体的表面形成的；并且所述多层级结构内部存在所述二硫键的交联；所述电中性或电负性的水溶性多糖为葡聚糖、海藻酸、水溶性淀粉、羧甲基葡聚糖、羧甲基纤维素、透明质酸、羟丙基甲基纤维素的一种或多种；所述基因为质粒、siRNA、microRNA、piRNA、circleRNA和lncRNA中的一种或多种；所述阳离子聚合物是由阳离子单体聚合，所述阳离子单体为甲基丙烯酸二乙氨基乙酯、甲基丙烯酸二乙基氨基乙酯、甲基丙烯酸二甲氨乙酯、丙烯酸二甲氨基乙酯、丙烯酸N,N-二乙基氨基乙酯、2-甲基-2-丙烯酸2-(4-吗啉基)乙基酯、丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵、甲基丙烯酸 2-氨基乙基酯盐酸盐和甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵中的一种或多种；所述交联剂为二烯丙基二硫、L-胱氨酸双丙烯酰胺、双丙烯酰胱胺或双（2-甲基丙烯酰氧基乙基）二硫醚中的一种或多种。