[发明专利]一种快速检测花生过敏原蛋白Ara h2的方法

权利要求书

1.一种细胞传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）、混合凝胶的制备：将氧化石墨烯与DMEM培养液按质量体积比为0.1g：100mL的比例混合，超声处理4-6min，使得氧化石墨烯均匀地分散在DMEM培养液中得到氧化石墨烯混合液，然后向含有1%海藻酸钠的DMEM培养液中滴加占DMEM培养液质量分数为10%的氧化石墨烯混合液，制得海藻酸钠/氧化石墨烯凝胶，之后向凝胶中添加纳米磁珠使得凝胶中的纳米磁珠的含量为1mg/mL，得到海藻酸钠/氧化石墨烯/纳米磁珠凝胶，再向凝胶中添加纳米金粒子，使得凝胶中纳米金的含量为0.4mg/mL，得到海藻酸钠/氧化石墨烯/纳米磁珠/纳米金混合凝胶；

2）、肥大细胞RBL-2H3的培养：在37℃、CO₂含量为5％的培养环境中，于含有体积浓度为10％的胎牛血清的DMEM培养基中培养肥大细胞RBL-2H3 2～3天，将肥大细胞与小鼠单克隆Ara h2 IgG1抗体孵育30min，之后收集细胞得到肥大细胞悬浮液；

3）、细胞固定：将细胞悬浮液与混合凝胶按体积比1:1混合，混匀后吸取20μL滴加在电极的表面，然后浸没于CaCl₂溶液中进行固定，固定6min，并置于5％CO₂的37℃培养箱孵育5min，制备得到细胞传感器。

2.根据权利要求1所述的一种细胞传感器的制备方法，其特征在于，还包括如下步骤：

电极清洁：将裸电极置于Piranha溶液中浸泡12-18min，之后分别用0.3μm和0.05μm的Al₂O₃抛光粉末将电极表面打磨抛成镜面，再用5%的稀硫酸、无水乙醇、超纯水依次超声清洗5-8min，氮气吹干，4℃条件下储存备用。

3.采用权利要求1或2所述方法制备得到的细胞传感器。

4.权利要求3所述细胞传感器用于快速检测花生过敏原蛋白Ara h2的方法。

5.根据权利要求4所述的快速检测花生过敏原蛋白Ara h2的方法，其特征在于，取清洁的玻碳电极，滴加细胞传感器后，于CaCl₂溶液中固定5min，之后滴加花生过敏原样品并将电极置于37℃下孵育5min，然后采用交流阻抗法考察工作电极界面的变化，并对电极进行表征，将检测的阻抗值带入标准曲线方程y＝48.82x+1.59，R²＝0.992中即可得到样品Arah2的检测结果。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，交流阻抗法条件为：初始电位：0.2V，振幅：0.005V，频率范围1-100kHz；电化学检测：在含有1.0mM Fe（CN）₆^3-或1.0mM Fe（CN）₆^4-的溶液中对细胞传感器进行电化学方法检测，记录电阻信号并通过最佳等效电路分别读取阻抗值。