[发明专利]一种完全均相测定髓过氧化物酶的检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明属于生物医学检验领域，具体涉及一种完全均相测定髓过氧化物酶(MPO)的检测试剂盒及检测方法。本发明完全均相测定髓过氧化物酶的检测试剂盒，包括试剂1、试剂2、触发剂；试剂1包括0.5μg/mL‑2μg/mL的吖啶酯标记的抗髓过氧化物酶抗体；试剂2包括0.05μg/mL‑0.3μg/mL的HRP标记的抗髓过氧化物酶抗体、0.01％‑0.5％的氧化酶。本发明还提供一种基于该试剂盒的完全均相测定髓过氧化物酶(MPO)的检测方法。本发明的检测试剂盒及检测方法灵敏度高、准确度好，无需包被，无需洗涤分离，反应时间明显缩短，操作更加简便，结合仪器检测能够满足临床检测要求。

技术领域

本发明属于生物医学检验领域，具体涉及一种完全均相测定髓过氧化物酶的化学发光检测试剂盒及检测方法。

背景技术

髓过氧化物酶(MPO)是一种过氧化物酶超家族亚铁血红素酶，相对分子量为150KD，主要存在于中性粒细胞内，是中性粒细胞活化的标志物。在生理状态下，MPO与H₂O₂反应最终生成HOCl，HOCl可以与一些氨基酸反应生成氯胺(NH₂Cl)，NH₂Cl有很强的抗微生物作用，提高自身免疫力，在机体防御中发挥着重要的作用。但机体过多的HOCl会氧化人体内的脂质、蛋白和DNA等，从而对机体造成损伤。其中最主要的影响就是引起动脉粥样硬化(AS)。研究发现MPO催化的产物HOCl氧化LDL最终导致泡沫细胞的形成。可以通过与NO合成酶反应导致NO的合成减少，导致血管舒张功能受损。还能引起斑块的不稳定，最终导致血栓的形成。在2015中国研究型医院高峰论坛中也提出了髓过氧化物酶这一话题，并且突出和强调了这一物质在心脑血管当中的前瞻性和重要性。在AS的监测过程中发现，MPO的敏感性远高于cTnI，因此MPO有望成为心血管疾病尤其是冠心病的诊断和预后新的标志物。

目前，检测MPO主要采用的方法有连续监测法、酶联免疫吸附法(ELISA)和流式细胞仪测定法等。连续监测法易受其他过氧化物酶(例如嗜酸性粒细胞过氧化物酶)和某些血红素蛋白(例如血红蛋白、肌红蛋白)的干扰。酶联免疫吸附法灵敏度不高，测定时间长，难以实现全自动化检测。流式细胞仪测定法技术程序比较复杂，需使用特殊仪器。相对于以上方法，化学发光法具有明显的优势，具有精确度高，无污染，检测速度快等优势。但目前还未开发MPO的化学发光检测方法，且传统的化学发光本身存在一些缺陷，需要包被、洗涤分离，操作复杂。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种完全均相测定髓过氧化物酶的化学发光检测试剂盒及其方法，该试剂盒属于化学发光法，具有化学发光检测方法的优势，同时无需包被，无需洗涤分离，反应快速，操作简便。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种完全均相测定髓过氧化物酶的检测试剂盒，所述试剂盒包括试剂1、试剂2、触发剂；所述试剂1包括吖啶酯标记的抗髓过氧化物酶抗体1；试剂2包括HRP标记的抗髓过氧化物酶抗体2、氧化酶。

在一种实施方式中，所述试剂1和所述试剂2包括缓冲液；所述缓冲液是pH6.0-8.0、5mM-100mM的PBS缓冲液。优选pH6.8-7.8、20mM-80mM的PBS缓冲液；进一步优选20mM-60mM的PBS缓冲液；再进一步优选20mM-40mM的PBS缓冲液。

在一些实施方式中，所述试剂1包括0.5μg/mL-2μg/mL吖啶酯标记的抗髓过氧化物酶抗体1、0.02％-0.2％硫代硫酸钠；优选0.8μg/mL-1.5μg/mL吖啶酯标记的抗髓过氧化物酶抗体1、0.05％-0.12％硫代硫酸钠。

进一步的，所述试剂1还包括：0.1％-1％BSA、0.1％-1％甘露醇、0.04％-0.1％ProClin 300。在一些实施方式中，所述试剂1优选包括：0.2％-0.8％BSA或0.3％-0.6％BSA、0.2％-0.8％甘露醇或0.3％-0.6％甘露醇、0.05％-0.08％ProClin 300。