[发明专利]一种生化试剂盒及其应用方法

权利要求书

1.一种生化试剂盒，其特征在于，包括盒体以及存放于所述盒体中的试剂；

所述试剂包括：浓度为5～40μM的试剂A，浓度为0.5～10μM的试剂B，浓度为500～50000units/mL的试剂C，浓度为1～10mM的试剂D，浓度为500～50000units/mL的试剂E，浓度为1～100μM的试剂F，浓度为500～50000units/mL的试剂G；和浓度为1～10μM的试剂H；

所述试剂A为Cas12a和/或Cas9；所述试剂B为sgRNA；所述试剂C为聚合酶；所述试剂D为硫代核苷酸；所述试剂E为核酸外切酶；所述试剂F为含有分子标签序列的试剂；所述试剂G为酶制剂；所述试剂H为含有通用测序引物序列和酶的试剂。

2.如权利要求1所述的生化试剂盒，其特征在于，所述试剂B为由sgDNA oligos经过转录而成的sgRNA混合物。

3.如权利要求1所述的生化试剂盒，其特征在于，所述试剂C为Klenow Fragment(3'→5'exo-)和/或DNA聚合酶I。

4.如权利要求1所述的生化试剂盒，其特征在于，所述试剂D为1-Thio-2'-Deoxyadenosine-5'-Triphosphate,1-Thio-2'-Deoxycytidine-5'-Triphosphate,1-Thio-2'-Deoxyguanosine-5'-Triphosphate,1-Thio-2'-Deoxythymidine-5'-Triphosphate中的其中一种或其任意组合的混合物。

5.如权利要求1所述的生化试剂盒，其特征在于，所述试剂E为T7核酸外切酶、T5核酸外切酶、RecJf核酸外切酶、核酸外切酶VII、核酸外切酶V、Lambda核酸外切酶、核酸外切酶III、核酸外切酶T或者核酸外切酶I中的一种或者其任意组合的混合物。

6.如权利要求1所述的生化试剂盒，其特征在于，所述分子标签序列的结构包括碱基数目在5～100个的通用序列区、碱基数目在0-24个的分子标签区和碱基数目在0-16个随机引物区。

7.如权利要求1所述的生化试剂盒，其特征在于，所述试剂G为Klenow Fragment(3'→5'exo-)、T4DNA聚合酶、Taq DNA聚合酶、Phi29聚合酶、Bst聚合酶、T4连接酶或者Taq连接酶中的一种或其任意组合的混合物。

8.如权利要求1所述的生化试剂盒，其特征在于，所述试剂H为碱基数目为5～100个的通用测序引物序列和高温聚合酶的混合物。

9.如权利要求1所述的生化试剂盒，其特征在于，所述试剂包括：浓度为20μM的试剂A，浓度为2μM的试剂B，浓度为5000units/mL的试剂C，浓度为5mM的试剂D，浓度为5000units/mL的试剂E，浓度为15μM的试剂F，浓度为5000units/mL的试剂G；和浓度为5μM的试剂H。

10.如权利要求1～9任意一项所述的生化试剂盒的应用方法，包括如下步骤：

将所述试剂A和试剂B稀释至使用浓度后混合形成混合液Ⅰ；

将所述混合液Ⅰ与样本基因组DNA进行孵育，得到第一孵育物；

将所述试剂C和试剂D稀释至使用浓度后混合形成混合液Ⅱ，并加入到所述第一孵育物中，形成第一处理液；

将所述试剂E稀释至使用浓度后加入到所述第一处理液中，得到第二处理液；

将所述试剂F和试剂G稀释至使用浓度后加入到所述第二处理液中，得到第三处理液；

将所述试剂H稀释至使用浓度后加入到所述第三处理液中，以扩增所述第三处理液中的样本基因组DNA，形成完整的可供高通量测序的文库。