[发明专利]一种生化试剂盒及其应用方法

说明书

本发明适用于生化技术领域，提供了一种生化试剂盒及其应用方法，该试剂盒包括：盒体以及存放于盒体中的试剂；试剂包括：浓度为5～40μM的试剂A，浓度为0.5～10μM的试剂B，浓度为500～50000units/mL的试剂C，浓度为1～10mM的试剂D，浓度为500～50000units/mL的试剂E，浓度为1～100μM的试剂F，浓度为500～50000units/mL的试剂G；和浓度为1～10μM的试剂H；试剂A为Cas12a和/或Cas9；试剂B为sgRNA；试剂C为聚合酶；试剂D为硫代核苷酸；试剂E为核酸外切酶；试剂F为含有分子标签序列的试剂；试剂G为酶制剂；试剂H为含有通用测序引物序列和酶的试剂。利用本发明的试剂对基因区域进行富集并构建基因文库，可较传统富集方式缩短3～5倍的时间，富集区域的局限性小，且操作简便，试剂成本较低。

技术领域

本发明属于生化技术领域，尤其涉及一种生化试剂盒及其应用方法。

背景技术

生物基因组大多数都很复杂且碱基数目巨大，比如人类基因组有30亿个碱基，其中基因区域只占其中的1-2％，研究通常是对这些基因区域进行研究，所以基因区域的富集技术则应运而生。

现有的基因区域富集技术多采用基因杂交捕获的方式，但是，这种杂交捕获技术的杂交时间长达4-24小时，并且仅适用于短基因区域(总长度小于或等于24kb的连续/非连续区域)；且在对这些基因区域进行富集时通常需要用到修饰有生物素的探针、杂交反应液和封闭试剂，整个富集的操作过程复杂且成本相对较高。

由此可见，现有的基因富集技术存在杂交时间长、富集区域局限性大、且操作复杂成本高的问题。

发明内容

本发明实施例提供一种生化试剂盒，旨在解决现有的基因富集技术存在杂交时间长、富集区域局限性大、且操作复杂成本高的问题。

本发明实施例是这样实现的，一种生化试剂盒，包括盒体以及存放于所述盒体中的试剂；

所述试剂包括：浓度为5～40μM的试剂A，浓度为0.5～10μM的试剂B，浓度为500～50000units/mL的试剂C，浓度为1～10mM的试剂D，浓度为500～50000units/mL的试剂E，浓度为1～100μM的试剂F，浓度为500～50000units/mL的试剂G；和浓度为1～10μM的试剂H；

所述试剂A为Cas12a和/或Cas9；所述试剂B为sgRNA；所述试剂C为聚合酶；所述试剂D为硫代核苷酸；所述试剂E为核酸外切酶；所述试剂F为含有分子标签序列的试剂；所述试剂G为酶制剂；所述试剂H为含有通用测序引物序列和酶的试剂。

进一步的，所述试剂B为由sgDNA oligos经过转录而成的sgRNA(small guideRNA)混合物。

进一步的，所述试剂C为Klenow Fragment(3'→5'exo-)和/或DNA聚合酶I。

进一步的，所述试剂D为

1-Thio-2'-Deoxyadenosine-5'-Triphosphate,1-Thio-2'-Deoxycytidine-5'-Triphosphate,1-Thio-2'-Deoxyguanosine-5'-Triphosphate,1-Thio-2'-Deoxythymidine-5'-Triphosphate中的其中一种或其任意组合的混合物。

进一步的，所述试剂E为T7核酸外切酶、T5核酸外切酶、RecJf核酸外切酶、核酸外切酶VII、核酸外切酶V、Lambda核酸外切酶、核酸外切酶III、核酸外切酶T或者核酸外切酶I中的一种或者其任意组合的混合物。

进一步的，所述分子标签序列的结构包括碱基数目在5～100个的通用序列区、碱基数目在0-24个的分子标签区和碱基数目在0-16个随机引物区。