[发明专利]一种完全均相测定脂蛋白相关磷脂酶A2的检测试剂盒及其方法

说明书

本发明属于生物技术领域，公开了一种完全均相测定脂蛋白相关磷脂酶A₂的检测试剂盒及其方法。本发明利用空间邻近化学发光技术实现完全均相检测脂蛋白相关磷脂酶A₂，它基于双夹心技术，两单克隆抗体分别结合在脂蛋白相关磷脂酶A₂分子的抗原决定簇上；将校准品或待测样本、辣根过氧化物酶标记的抗人脂蛋白相关磷脂酶A₂抗体、吖啶酯标记的抗人脂蛋白相关磷脂酶A₂抗体一起加入到微孔板中，无需包被，孵育后两单克隆抗体与样本中的抗原形成抗体‑抗原‑抗体夹心复合物，不需要洗涤过程，加入触发剂后，连续检测一段时间内的发光强度值，并计算样本中脂蛋白相关磷脂酶A₂的含量。该试剂盒具有质量稳定、检测快速便捷、灵敏度高、特异性强的特点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种完全均相测定脂蛋白相关磷脂酶 A₂的检测试剂盒及其方法。

背景技术

脂蛋白相关磷脂酶A₂(Lp-PLA₂)是磷脂酶A₂家族成员，分子量45.4kDa。人血浆Lp-PLA₂主要由成熟的巨噬细胞和其他炎症细胞产生。人体内循环中的 Lp-PLA₂以与脂蛋白颗粒结合的形式存在，其中2/3与低密度脂蛋白结合，1/3 与高密度脂蛋白、极低密度脂蛋白(VLDL)结合。故Lp-PLA₂既有促动脉粥样硬化的作用，也有抗动脉粥样硬化的作用，但Lp-PLA₂流行病学研究发现， Lp-PLA₂活性与HDL呈负相关。目前Lp-PLA₂促动脉粥样硬化作用的研究较多。结合在LDL上的Lp-PLA₂随LDL被运送到血管壁上易受损伤的区域，水解氧化型低密度脂蛋白，水解后产生致炎症反应及致动脉粥样硬化因子溶血卵磷脂和氧化型游离脂肪酸，后两者是促炎介质，不仅能吸引炎性细胞及诱导趋化因子加重斑块炎症反应，而且还能增加斑块的易损性，而斑块破裂导致炎性细胞释放更多Lp-PLA₂。

目前检测Lp-PLA₂的方法比较多，常用方法有免疫荧光法、连续监测法、放射性免疫法、酶联免疫分析法、磁微粒化学发光法、化学发光免疫分析法等。随着生物科技的发展，其检测方法逐渐向酶联免疫吸附试验、化学发光免疫分析法发展。免疫荧光法的主要缺点是非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序也比较复杂；连续监测法是指每隔一定时间(2～60s)，连续多次测定酶促反应过程中某一反应产物或底物量随时间变化的数据，求出酶反应初速度，间接计算酶活性浓度的方法，该方法技术程序也比较复杂，因酶种类和反应条件而异，必须用实验方法进行确定；放射性免疫法具有放射性污染和对人体的损伤，而且还需要较高的实验室条件等；酶联免疫分析法的缺点在于无法准确进行定量，且批间差异较大，线性范围有限，无法持续监控 Lp-PLA₂水平；化学发光免疫分析法是一种较为先进的免疫学方法，具有高灵敏、高特异、快速、高通量等特点。现阶段化学发光免疫法也逐渐成为检测Lp-PLA₂水平的主流方法，并且由于自动化检测系统的普及，极大地提升了实验的精密度。根据目前Lp-PLA₂的临床应用情况，市场应用前景较好的可靠方法为化学发光免疫分析法。