[发明专利]一种个体识别体系、检测方法及其应用

权利要求书

1.一种个体识别体系，其特征在于，该个体识别体系包括以下SNP位点：rs1726866、rs671、rs762551、rs182549、rs4988235、rs12540951、rs7349332、rs1160312、rs17646946、rs7349332、rs12913832、rs1800414、rs17822931、rs10212419、rs7559271、rs1042725、rs6060371、rs6591536、rs307377、rs307355、rs713598、rs752688、rs8065080、rs1050450、rs5063、rs699、rs6269、rs2155219。

2.根据权利要求1所述个体识别体系，其特征在于，该个体识别体系包括上述SNP位点的引物信息，所述引物信息包括扩增引物和单碱基延伸引物。

3.根据权利要求2所述个体识别体系，其特征在于，所述扩增引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物的序列如SEQ ID NO.1-27所示，所述反向引物的序列如SEQ ID NO.28-54所示，所述单碱基延伸引物的序列如SEQ ID NO.55-81所示。

4.根据权利要求1至3任一项所述个体识别体系的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取待检测的干血滤纸片或口腔拭子样本，提取DNA，检测合格后保存备用；

(2)以上述步骤(1)中提取的DNA为模板，以SEQ ID NO.1-54的序列为特异性引物进行PCR扩增反应获得目标位点的PCR产物片段；

(3)对反应产物进行碱性磷酸酶处理；

(4)将步骤(3)处理后的PCR反应产物进行单碱基延伸反应，所用单碱基延伸引物的序列为如SEQ ID NO.55-81所示；

(5)将上述步骤(4)处理后的延伸产物进行树脂纯化；

(6)将上述步骤(5)树脂纯化后的延伸产物进行质谱分析，得到SNP位点所对应的分子量质谱峰图。

5.根据权利要求4所述个体识别体系的检测方法，其特征在于，上述步骤(2)中PCR扩增反应体系为：0.8μl的water(HPLC grade)，0.5μl含有20mM MgCl₂的10x PCR Buffer、0.4μl浓度为25mM MgCl₂、0.1μl浓度为25mM dNTP Mix、1μl浓度为0.5uM Primer Mix、0.2μl浓度为5U/μl PCR Enzyme、2μl浓度为5ng/μL DNA，反应液总体积为5μl，混合后涡旋震荡离心；PCR反应程序为：95℃预变性2min、然后95℃30s、56℃30s，共45个循环，72℃，60s，72℃5min，最后4℃保存。

6.根据权利要求4所述个体识别体系的检测方法，其特征在于，上述步骤(3)中的碱性磷酸酶处理过程为：配制虾碱性磷酸酶处理反应液，将步骤(2)中的PCR反应产物进行碱性磷酸酶处理，消除反应体系中剩余的dNTP，其消化反应体系为：1.53μl的Nanopure Water、0.17μl的SAP Buffer、0.30μl的浓度为1.7U/ul SAP Enzyme，反应液总体积为2μl；上述消化反应的程序为37℃40min，85℃5min，最后在4℃保存。

7.根据权利要求4所述个体识别体系的检测方法，其特征在于，上述步骤(4)中单碱基延伸反应体系为：0.619μl Nanopure water、0.2μl iPLEX Buffer、0.2μl iPLEXTermination mix、0.94μl Extend Primer Mix、0.041μl iPLEX Enzyme，反应液总体积为2μl；上述单碱基延伸反应程序为：94℃预变性30s、然后94℃5s；52℃5s、80℃5s、共进行5个内循环；94℃5s、52℃5s、80℃5s共进行35个外循环；72℃保持3min、最后4℃保存。