[发明专利]一种饲料呕吐毒素降解微生物筛选及鉴定

说明书

一种饲料呕吐毒素降解微生物筛选及鉴定，其特征在于，包括以下步骤：(1)、从鸡肠道中筛选分离到一株江都丛毛单胞菌；(2)、把江都丛毛单胞菌经ICR小鼠急性毒性试验，确定其具有高度安全性，对人体无害；(3)、把江都丛毛单胞菌样品经无菌生理盐水适当稀释后，按10％接种量接种于含一定浓度DON的培养基中，于120r/min，30℃震荡培养。本发明具有如下优点：本发明12h内对DON的降解率为56.56％，24h降解率为91.12％，而36h内的降解效率高达96.76％该菌的成功筛选，为其他霉菌毒素菌的分离和筛选提供了可行的参考研究方法，也为DON生物降解的应用奠定基础。

技术领域

本发明涉及生物降解技术领域，具体涉及一种饲料呕吐毒素降解微生物筛选及鉴定。

背景技术

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol，简称DON)，又称呕吐毒素，学名为3,7,15-三羟基-12,13-环氧单端孢霉-9-烯-8-酮，是污染小麦、玉米等谷物类霉菌——禾谷镰刀菌和黄色镰刀菌等丝状真菌的次级代谢产物。DON对人、畜均具有高度危害性，会引起人和动物腹痛、腹泻、呕吐、肠胃炎等疾病，其毒性与DON分子上C12/C13上的环氧基团及C3-OH有关。研究表明：饲料或粮食中DON含量超过1000μg/kg时会对人和动物健康产生危害，我国农业部2011年对动物饲料中DON的限量标准做了明确规定，其值也不应超过1000μg/kg。然而，近年来饲料及其原料呕吐毒素污染情况仍然严重，据江苏奥迈检测中心2017年饲料及原料霉菌毒素分析报告指出，我国饲料及其原料样品中呕吐毒素阳性检出率均接近100％，其中植物性饲料原料的DON平均值超过1000μg/kg，猪配合饲料DON超标率为3.14％，而其他配合饲料DON超标率高达16.67％，其中猪配合饲料DON阳性样品平均值为583.56μg/kg，其他配合饲料DON阳性样品平均值高达847.54μg/kg。目前国内外关于DON较为普遍的脱毒方法主要有物理法、化学法及生物降解法。物理法的脱毒效果并不是很理想；化学法，虽然能够达到脱毒的效果，但是会导致谷物营养损失；生物降解法，通过筛选自然界中的微生物，在温和条件下降解毒素，相比理化方法，更加高效、安全。近年来，国内外科研工作者筛选分离到不同的菌株，以其降解DON并取得了一定的研究进展，但其对DON的降解效率不高，降解时间长，存在不易推广的应用方面缺陷。丁轲等(2015)从55株分离菌中筛选得到一株高效降解DON的蜡样芽孢杆菌B.JG05，降解率最高可达80.61％，且对含DON的饲料，60h后的降解率为82.68％。徐剑宏等(2010)用高产毒禾谷镰刀菌F-25接种灭菌的小麦籽粒，培养后获得DON毒素；然后以DON毒素为唯一碳源进行DON毒素降解菌的驯化富集培养，得到能够降解DON毒素的菌株DDS-1，该菌在最适条件下48h后，方可降解95％的DON；如把DDS-1添加到小麦饲料中后，48h后饲料中的DON毒素降解率仅有75.47％在国外，D.Pan等(2015)分离小麦籽实内生菌作为小麦禾谷镰刀菌及降解DON的生物防护剂，获得4株抑制禾谷镰刀菌生长及DON的合成的菌株，其中巨大芽孢杆菌BM1可减少小麦赤霉病的发生率为93％，所有菌株对DON均有明显的降解能力，可降低50-90％的DON量。Michihiro Ito等采用原位植物四步富集培养法筛选出一株降解DON的放线菌MIM116，该菌株培养液中添加0.01％的Tween80，具有促进菌种生长和DON降解的作用，可使小麦天然样品中DON由3mg/kg降低至1mg/kg。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种以DON为唯一碳源，利用无机盐培养基生长从鸡场到中分离出可高效降解DON的细菌，并对其降解特性进行研究，为利用该菌株对粮食、饲料中的DON脱毒应用奠定基础的饲料呕吐毒素降解微生物筛选及鉴定。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为一种饲料呕吐毒素降解微生物筛选及鉴定，其特征在于，包括以下步骤：

(1)、从鸡肠道中筛选分离到一株江都丛毛单胞菌；

(2)、把江都丛毛单胞菌经ICR小鼠急性毒性试验，确定其具有高度安全性，对人体无害；