[发明专利]一种间充质干细胞复苏保护液、制备方法和复苏方法在审
| 申请号： | 201811582698.7 | 申请日： | 2018-12-24 |
| 公开（公告）号： | CN109486747A | 公开（公告）日： | 2019-03-19 |
| 发明（设计）人： | 高雪华;张学超;海泉 | 申请（专利权）人： | 成都清科生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;C12N5/073;C12N5/0775 |
| 代理公司： | 成都正华专利代理事务所(普通合伙) 51229 | 代理人： | 李亚男 |
| 地址： | 610041 四川省成都市中国（四川*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 复苏 保护液 间充质干细胞 充质干细胞 细胞 制备 种间 细胞培养 清洗 融化 生物学活性 完全培养基 细胞回收率 新鲜培养基 细胞复苏 左旋肉碱 海藻糖 清洗液 冻存 混匀 原液 沉淀 取出 协同 转入 | ||
1.一种间充质干细胞复苏保护液，其特征在于，包括细胞培养原液、新鲜培养基、左旋肉碱和海藻糖，复苏保护液的pH值为7.2-7.6；其中，新鲜培养基和细胞培养原液的体积比为1:0.7-1.0，左旋肉碱和海藻糖的终浓度分别为1-5mg/mL、0.1-0.3mg/mL。
2.根据权利要求1所述的间充质干细胞复苏保护液，其特征在于，左旋肉碱和海藻糖的终浓度分别为3mg/mL、0.2mg/mL。
3.根据权利要求1所述的间充质干细胞复苏保护液，其特征在于，新鲜培养基和细胞培养原液的体积比为1:1。
4.根据权利要求1或3所述的间充质干细胞复苏保护液，其特征在于，新鲜培养基为完全培养基。
5.根据权利要求1或3所述的间充质干细胞复苏保护液，其特征在于，细胞培养原液为培养完细胞，将细胞分离后剩余的培养基，其中VEGF含量高于60pg/mL，EGF含量高于25pg/mL，FGF含量高于80pg/mL，HGF含量高于760pg/mL，TGF含量高于70pg/mL，IGF-1含量高于0.03ng/mL。
6.根据权利要求1所述的间充质干细胞复苏保护液，其特征在于，间充质干细胞为胎盘源间充质干细胞、乳牙源间充质干细胞、脂肪源间充质干细胞或子宫内膜源间充质干细胞。
7.权利要求1-6任一项所述的间充质干细胞复苏保护液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将新鲜培养基和细胞培养原液混合，然后再加入左旋肉碱和海藻糖，混匀，然后调节溶液pH值为7.2-7.6，制得。
8.采用权利要求1-6任一项所述的复苏保护液复苏间充质干细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将冻存的间充质干细胞取出，先在42-45℃放置至开始融化，然后转入37-40℃放置至完全融化；
(2)向步骤(1)所得物中加入复苏保护液，混匀，离心，然后用复苏保护液对细胞进行清洗；
(3)向清洗好的间充质干细胞中加入复苏保护液，调整细胞密度后进行培养，24h后更换为完全培养基，然后按常规技术继续培养。
9.根据权利要求8所述的间充质干细胞的复苏方法，其特征在于，步骤(1)中先在42℃放置至开始融化，然后转入37℃放置至完全融化。
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