[发明专利]一种间充质干细胞复苏保护液、制备方法和复苏方法

说明书

本发明提供了一种间充质干细胞复苏保护液、制备方法和复苏方法。复苏保护液包括细胞培养原液、新鲜培养基、左旋肉碱和海藻糖。复苏方法包括：将冻存的间充质干细胞取出，先在42‑45℃放置至开始融化，然后转入37‑40℃放置至完全融化；然后加入复苏保护液混匀，离心，对沉淀进行清洗；向清洗好的间充质干细胞中加入复苏保护液，调整细胞密度后进行培养，24h后更换为完全培养基，然后按常规技术继续培养。本发明通过特定的组分组成的复苏保护液，各组分之间协同起作用，不仅仅作为复苏细胞使用，还可作为细胞清洗液使用。将复苏保护液与复苏方法结合对间充质干细胞进行复苏可明显提高细胞复苏后存在的细胞回收率和生物学活性。

技术领域

本发明属于细胞技术领域，具体涉及一种间充质干细胞复苏保护液、制备方法和复苏方法。

背景技术

间充质干细胞细胞是具有自我复制能力和多向分化能力的干细胞，具有免疫原性低，细胞原始性强的优点，已经成为细胞治疗中的重要种子细胞。冻存与复苏是间充质干细胞发挥治疗作用的基础，尤其是细胞复苏后的回收率与生物学活性对间充质干细胞的治疗能力有重要的影响。目前对间充质干细胞进行复苏，一般都采用生理盐水、PBS缓冲液或培养基进行清洗，存在复苏后细胞回收率与生物学活性较低的缺点。因此，研究一种用于提高复苏后细胞回收率和生物学活性的间充质干细胞复苏保护液是亟待解决的问题。

发明内容

针对现有技术中存在的上述问题，本发明提供一种间充质干细胞复苏保护液、制备方法和复苏方法，可有效解决间充质干细胞复苏后存在的细胞回收率和生物学活性低的问题。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种间充质干细胞复苏保护液，包括细胞培养原液、新鲜培养基、左旋肉碱和海藻糖，复苏保护液的pH值为7.2-7.6；其中，新鲜培养基和细胞培养原液的体积比为1:0.7-1.0，左旋肉碱和海藻糖的终浓度分别为1-5mg/mL、0.1-0.3mg/mL。

进一步地，新鲜培养基和细胞培养原液的体积比为1:1。

进一步地，左旋肉碱和海藻糖的终浓度分别为3mg/mL、0.2mg/mL。

进一步地，新鲜培养基为新鲜的完全培养基(生产商为Gibco)。

进一步地，细胞培养原液为培养完细胞，将细胞分离后剩余的培养基，其中VEGF含量高于60pg/mL，EGF含量高于25pg/mL，FGF含量高于80pg/mL，HGF含量高于760pg/mL，TGF含量高于70pg/mL，IGF-1含量高于0.03ng/mL。

进一步地，间充质干细胞为胎盘源间充质干细胞、乳牙源间充质干细胞、脂肪源间充质干细胞或子宫内膜源间充质干细胞。

上述间充质干细胞复苏保护液的制备方法包括以下步骤：将新鲜培养基和细胞培养原液混合，然后再加入左旋肉碱和海藻糖，混匀，然后调节溶液pH值为7.2-7.6，制得。

采用上述复苏保护液复苏间充质干细胞的方法，包括以下步骤：

(1)将冻存的间充质干细胞取出，先在42-45℃放置至开始融化，然后转入37-40℃放置至完全融化；

(2)向步骤(1)所得物中加入复苏保护液，混匀，于4℃、500-800×g条件下离心3-5min，然后用复苏保护液对细胞进行清洗；

(3)向清洗好的间充质干细胞中加入复苏保护液，调整细胞密度后进行培养，24h后更换为完全培养基，然后按常规技术继续培养。

进一步地，步骤(1)中先在42℃放置至开始融化，然后转入37℃放置至完全融化。

本发明提供的间充质干细胞复苏保护液、制备方法和复苏方法，具有以下有益效果：