[发明专利]一种提高非整合减毒李斯特菌疫苗安全性的方法

权利要求书

1.一种制备重组李斯特菌的方法，其包括以下步骤：

(1)将重组核酸分子插入质粒或表达载体中，构建重组质粒或重组表达载体；

(2)将所述重组质粒或重组表达载体转染至李斯特菌中，得到重组李斯特菌；

其中，所述重组核酸分子包含编码重组多肽的开放阅读框，所述重组多肽包含融合至衍生李斯特菌溶血素(LLO)多肽的异源性抗原，所述重组的核酸分子还包含启动子；其中，所述衍生李斯特菌溶血素(LLO)多肽的氨基酸序列选自：如SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQID NO:10、SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述异源性抗原选自肿瘤抗原或非肿瘤抗原。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述非肿瘤抗原选自OVA或具有OVA功能的片段。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述OVA或具有OVA功能的氨基酸片段的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，编码所述OVA或具有OVA功能的氨基酸片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:16所示。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述重组核酸分子的核苷酸序列还包含连接序列，所述连接序列连接编码所述衍生李斯特菌溶血素(LLO)多肽的核苷酸序列和编码所述异源性抗原的核苷酸序列。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述异源性抗原选自肿瘤抗原或非肿瘤抗原。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述非肿瘤抗原选自OVA或具有OVA功能的片段。

9.根据权利要求6所述的方法，其中，所述连接序列包含编码如SEQ ID NO:20所示的序列的核苷酸序列。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述连接序列编码的氨基酸序列包含如SEQ IDNO:20所示的序列的一个、二个、或三个以上的重复。

11.根据权利要求6或9所述的方法，其中，包含所述异源性抗原的连接序列所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示。

12.根据权利要求1-10任一项所述的方法，其中，所述启动子序列选自编码Phly基因的序列。

13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述重组核酸分子的核苷酸序列还包含用于检测的标签序列或编码代谢产物的基因序列。

14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述代谢产物选自次级代谢产物。

15.根据权利要求1-10任一项所述的方法得到的重组李斯特菌。

16.一种预防或治疗性疫苗，其中，所述疫苗包含预防或治疗有效量的，根据权利要求15所述的重组李斯特菌。

17.根据权利要求16所述的预防或治疗性疫苗，其中，所述疫苗还包含免疫刺激剂。

18.根据权利要求17所述的预防或治疗性疫苗，其中，所述免疫刺激剂选自佐剂。

19.根据权利要求15所述的重组李斯特菌或包含所述重组李斯特菌的组合物、或者根据权利要求16或17所述的预防或治疗性疫苗在制备用于杀死细胞的药物中的应用。

20.根据权利要求19所述的应用，其中，所述细胞选自肿瘤细胞。

21.根据权利要求20所述的应用，其中，所述肿瘤细胞选自癌细胞。