[发明专利]一种制备黑曲霉种子的方法和柠檬酸的发酵方法

权利要求书

1.一种制备黑曲霉种子的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)将黑曲霉麸曲接种到黑曲霉种子培养基中，进行第一种子培养，得到第一种子培养液，并将所述第一种子培养液中的黑曲霉进行球菌和菌丝的断裂和分离，得到第一菌丝和第一菌球；

(2)将步骤(1)得到的第一菌丝接种到黑曲霉种子培养基中，进行第二种子培养，得到第二种子培养液，并将所述第二种子培养液中的黑曲霉进行球菌和菌丝的断裂和分离，得到第二菌丝和第二菌球；

其中，所述黑曲霉种子包括第一菌球和/或第二菌球。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(2)中所述第二种子培养为多级种子培养。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述多级种子培养为：将上一级种子培养得到的种子培养液中的黑曲霉进行球菌和菌丝的断裂和分离，得到上一级菌球和上一级菌丝，并将上一级菌丝接种到黑曲霉种子培养基中，进行下一级种子培养。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其中，通过搅拌的方式对第一种子培养液和/或第二种子培养液中的黑曲霉进行球菌和菌丝的断裂，所述搅拌的速度为110-150rpm；

通过离心或过滤的方式对断裂后的第一菌丝和第一菌球进行分离和/或第二菌丝和第二菌球进行分离。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述分离得到的第一菌丝和/或第二菌丝的长度为10-100微米，优选为30-50微米。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，以每毫升的黑曲霉种子培养基为基准，黑曲霉麸曲的接种量使得黑曲霉孢子的接种量为1×10⁵-5×10⁵个孢子，优选为2×10⁵-4×10⁵个孢子。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，在以每毫升的黑曲霉种子培养基为基准，第一菌丝的接种量为2×10⁴-1.0×10⁵根，优选为4×10⁴-7×10⁴根。

8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述第一种子培养的条件包括：培养温度为30-40℃，时间为20-40h，pH为4-6，罐压为60-90KPa，搅拌转速70-100rpm，通气风量为0.1-0.6体积：(体积·分钟)；

所述第二种子培养的条件包括：培养温度为30-40℃，时间为15-30h，pH为4-6，罐压为60-90KPa，搅拌转速70-100rpm，通气风量为0.1-0.6体积：(体积·分钟)；

优选地，所述第二种子培养的条件包括：培养温度为35-40℃，时间为15-25h，pH为5-6，罐压为60-80KPa，搅拌转速80-90rpm，通气风量为0.2-0.5体积：(体积·分钟)。

9.一种柠檬酸的发酵方法，其特征在于，该方法包括：

(1)按照权利要求1-8中任意一项所述的方法制备黑曲霉种子；

(2)将步骤(1)制备得到的黑曲霉种子接种到柠檬酸发酵培养基中进行发酵培养。

10.根据权利要求1所述的方法，其中，所述发酵培养的条件包括：发酵温度为35-45℃，时间为50-70h，pH为3-5，搅拌转速70-100rpm，以发酵罐中发酵液的总体积为基准，通气风量使得发酵液中的溶氧值为35-60％。