[发明专利]UPLC法快速测定西红花有效成分含量及鉴别非法染色

权利要求书

1.一种UPLC法波长切换技术测定西红花有效成分含量及鉴别非法染色物的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)配制含有西红花苷-I、西红花苷-Ⅱ、柠檬黄、金胺O、新品红和胭脂红的混合对照品溶液；

(2)将待测样品配制成西红花供试品溶液；

(3)取ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱，将步骤(1)所述混合对照品溶液和步骤(2)所述西红花供试品溶液分别上色谱柱，用洗脱液进行梯度洗脱；其中，所述洗脱液由流动相A和流动相B组成，流动相A为乙腈，流动相B为乙酸铵-乙酸水溶液；梯度洗脱中流动相A在洗脱液中所占体积分数为：

第0～3min，流动相A体积分数从10％匀速上升到37％；

第3～9min，流动相A体积分数＝37％；

第9～10min，流动相A体积分数从37％匀速下降到10％；

(4)采用UPLC定时波长自动切换技术，对不同时间段的组分测定不同波长下的吸光值，所述0min是从步骤(3)中进样开始计时：

第0～2.0min，在432nm波长下检测柠檬黄；

第2.0～4.0min，在509nm波长下检测胭脂红；

第4.0～5.3min，在440nm波长下检测西红花苷-I和西红花苷-Ⅱ；

第5.3～6.5min，在550nm波长下检测新品红；

第6.5～7.0min，在432nm波长下检测金胺O；

第7.0～8.0min，在550nm波长下检测新品红；

第8.0～8.7min，在432nm波长下检测金胺O；

第8.7～10.0min，在550nm波长下检测新品红；

(5)将西红花供试品溶液的谱图和混合对照品溶液的谱图进行比对，对待测样品中的西红花苷-I、西红花苷-Ⅱ、柠檬黄、金胺O、新品红和胭脂红进行定性检测；

(6)配制含有西红花苷-I、西红花苷-Ⅱ的混合对照品，并稀释至系列质量浓度，然后按照步骤(3)和(4)的色谱条件上样测定，采用外标法进行定量。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(6)中的外标法的步骤为：以峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线，分别得到西红花苷-I、西红花苷-Ⅱ的线性回归方程，将待测样品的峰面积代入线性回归方程，对待测样品中的西红花苷-I、西红花苷-Ⅱ进行定量检测。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)所述流动相B为含0.05％乙酸的0.05mol/L乙酸铵水溶液。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)所述混合对照品溶液的配制方法为：分别精密称取西红花苷-I、西红花苷-Ⅱ、柠檬黄、金胺O、新品红和胭脂红对照品适量，置于5mL容量瓶中，分别使用流动相A与流动相B体积比1:9的溶液将它们配制成质量浓度分别为0.42、0.40、0.41、0.44、0.49、0.42mg/mL的对照品储备溶液；精密吸取上述对照品储备溶液各1mL于同一个10mL容量瓶中，加入体积分数70％的乙醇稀释定容，得西红花混合对照品溶液。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)所述西红花供试品溶液的配制方法可以为：精密称取西红花药材粉末20～60mg，加入乙醇50～90mL，再以流动相A和流动相B体积比1:9的混合溶液定容至100mL，摇匀后，过滤溶液得到。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：在加入乙醇后，对溶液进行超声处理15～30min。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于：柱温为32.5～37.5℃。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于：还包括如下步骤：

(7)将西红花供试品溶液的色谱图和混合对照品溶液的色谱图进行比对后，若供试品溶液的色谱图中出现与对照品溶液的色谱图保留时间一致的谱峰，则对该谱峰进行光谱扫描；

(8)若该谱峰的光谱图与对照品的光谱图也一致，则比较它们的色谱纯度数据。