[发明专利]UPLC法快速测定西红花有效成分含量及鉴别非法染色

说明书

本发明一种UPLC法波长切换技术测定西红花有效成分含量及鉴别非法染色物的方法，其包括如下步骤：(1)配制含有西红花苷‑I、西红花苷‑Ⅱ、柠檬黄、金胺O、新品红和胭脂红的混合对照品溶液；(2)配制西红花供试品溶液；(3)上色谱柱；(4)采用UPLC定时波长自动切换技术，对不同时间段的组分测定不同波长下吸光值；(5)对待测样品中的西红花苷‑I、西红花苷‑Ⅱ、柠檬黄、金胺O、新品红和胭脂红进行定性检测；(6)对待测样品中的西红花苷‑I、西红花苷‑Ⅱ进行定量检测。本发明在活性成分含量测定的同时，更直观地判断样品中是否存在非法染色情况，避免了测定单个成分、逐步判断的繁琐步骤，准确灵敏、重复性好，且对仪器设备要求较低。采用该方法，能够更快速、全面有效的控制西红花质量，为企业产品生产所用的西红花原料质量控制提供方法依据。

技术领域

本发明属于药物分析化学领域，具体涉及西红花多种成分的检测方法。

背景技术

西红花又称藏红花、番红花，为鸢尾科植物番红花Crocus sativus L.的干燥柱头，具有活血化瘀，凉血解毒，解郁安神之功效。西红花由于特殊的用药部位使得其产量低，价格昂贵，市场上造假、掺假的情况十分严重，原料质量参差不齐，非法染色情况甚是严峻。在对市场造成冲击的同时，其中的一些偶氮类色素对人体也存在一定的健康危害。而原料的好坏直接决定了产品的品质，所以有必要对西红花进行全面的质量控制，有效成分含量测定和非法染色鉴别缺一不可。

西红花苷(crocins)是其主要活性成分，西红花药材的质量优劣与西红花苷含量密切相关。为了加强监管，国家食品药品监督管理局发布了药品补充检验方法和检验项目批准件2011001，对金胺O、新品红、柠檬黄和胭脂红4种常见非法染色物进行检验。近年来，检测西红花药材质量及鉴别非法染色的文献报道也较多，但未见同时定量西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ和鉴别金胺O、新品红、柠檬黄和胭脂红4种常见染料的检测方法。两项检测工作分开进行，严重影响了工作效率，故有必要建立西红花高效、快速的整体表征和质量控制方法。

现有技术中检测西红花药材质量及鉴别非法染色的法规及文献报道较多。西红花品质评价分析方面，日本药典-JP16、英国药典-BP2013、欧洲药典-EP8及ISO-3632都采用紫外-可见分光光度法定量西红花总苷来评价西红花的质量；

2015年版《中国药典》采用HPLC法检测西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ含量以评价西红花的质量；也有文献报道采用近红外光谱及拉曼光谱技术均建立了较好的西红花苷定量模型]；非法染色鉴别方面，张彬彬等建立了一种薄层色谱-表面增强拉曼光谱法成功检测经金胺O、新品红、柠檬黄和胭脂红4种常见染料染色的西红花药材。付凌燕等采用液-质联用以及对照试剂对照的方法，对市场上西红花非法添加的色素鉴定为柠檬黄、胭脂红、金胺O和新品红，又建立薄层色谱和高效液相色谱法鉴别非法染色情况。但未见同时定量西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ和检测金胺O、新品红、柠檬黄和胭脂红4种常见染料的检测方法。

发明内容

本发明现将《中国药典》2015版中有效成分的检测方法同药典补充方法里对柠檬黄、胭脂红、金胺O和新品红4种目前市场上常见非法色素的分析方法结合起来，联合使用UPLC定时波长自动切换技术及梯度洗脱法，快速测定西红花有效成分西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ含量及鉴别柠檬黄、胭脂红、金胺O和新品红4种常见非法染色物，方法方便快捷、准确度高，仪器设备要求低，大大提高工作效率的同时减少名贵药材的消耗及相关实验所带来的时间及经济成本，为企业产品的生产打下良好的基础。

首先，本发明提供了一种UPLC法波长切换技术测定西红花有效成分含量及鉴别非法染色物的方法，其包括如下步骤：

(1)配制含有西红花苷-I、西红花苷-Ⅱ、柠檬黄、金胺O、新品红和胭脂红的混合对照品溶液；

(2)将待测样品配制成西红花供试品溶液；