[发明专利]提取全血中基因组DNA的方法和试剂盒在审
| 申请号： | 201811585235.6 | 申请日： | 2018-12-24 |
| 公开（公告）号： | CN109609493A | 公开（公告）日： | 2019-04-12 |
| 发明（设计）人： | 方楠;白灵;李红蕊;王建伟;伍启熹;刘倩;刘珂弟;唐宇 | 申请（专利权）人： | 北京优迅医学检验实验室有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京康信知识产权代理有限责任公司 11240 | 代理人： | 韩建伟;路秀丽 |
| 地址： | 100195 北京市海*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 白细胞 打断 基因组DNA 全血 对白细胞 试剂盒 蛋白质 蛋白质交联 片段缺失 细胞裂解 游离DNA 保存液 采血管 解交联 小片段 染色体 交联 裂解 位点 暴露 重复 | ||
1.一种提取全血中基因组DNA的方法，所述方法包括：
从全血中分离出白细胞；
对所述白细胞进行打断，得到打断后的白细胞；
对所述打断后的白细胞进行细胞裂解和DNA-蛋白质解交联，得到所述基因组DNA。
2.根据权利要求1所述的方法，从全血中分离出白细胞的步骤包括：
向所述全血中加入红细胞裂解液，得到裂解浆液；
对所述裂解浆液进行过滤，得到所述白细胞。
3.根据权利要求1所述的方法，对所述白细胞进行超声打断，得到所述打断后的白细胞；
优选地，所述超声打断的条件为：功率为10～50％，超声5～40秒，暂停5～30秒，总时间为0.5～1小时。
4.根据权利要求1或3所述的方法，对所述打断后的白细胞进行细胞裂解和DNA-蛋白质解交联，得到所述基因组DNA的步骤包括：
采用盐离子溶液和蛋白酶K对所述打断后的白细胞进行细胞裂解和DNA-蛋白质解交联，得到解交联混合液；
对所述解交联混合液中的DNA进行沉淀和纯化，得到所述基因组DNA。
5.根据权利要求4所述的方法，所述沉淀和纯化的步骤中，采用异丙醇与磁珠的混合物对所述解交联混合液中的DNA进行沉淀和纯化；优选地，所述异丙醇与所述磁珠的体积混合比为500:10～100:10。
6.根据权利要求4所述的方法，所述盐离子溶液包括：0.01～0.5mol/L的NaCl，2～6mmol/L的Na2HPO4，0.1～3mmol/L的KH2PO4，0.1～2mM EDTA以及0.5～5％SDS。
7.一种提取全血中基因组DNA的试剂盒，所述试剂盒包括红细胞裂解液、白细胞打断用重悬液、白细胞裂解液及DNA-蛋白质解交联液。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，所述白细胞裂解液包括0.01～0.5mol/L的NaCl，2～6mmol/L的Na2HPO4，0.1～3mmol/L的KH2PO4，0.1～2mM EDTA以及0.5～5％SDS。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，所述DNA-蛋白质解交联液为蛋白酶K。
10.根据权利要求7至9中任一项所述的试剂盒，所述试剂盒还包括DNA沉淀液和DNA纯化磁珠，优选所述DNA沉淀液为异丙醇。
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