[发明专利]提取全血中基因组DNA的方法和试剂盒

说明书

本发明提供了一种提取全血中基因组DNA的方法和试剂盒。该方法包括从全血中分离出白细胞；对白细胞进行打断，得到打断后的白细胞；对打断后的白细胞进行细胞裂解和DNA‑蛋白质解交联，得到基因组DNA。通过创造性的采用打断白细胞处理的方法，通过将DNA和蛋白质打断为小片段，从而使DNA‑蛋白质交联的位点暴露，易于被裂解和解交联，从而使所提取的DNA相对更全面完整。且得到的DNA片段满足后续建库的需求，不需要再重新进行打断。从而针对性的解决了游离DNA采血管的保存液对白细胞固定后所导致的染色体Z值异常，出现大量片段缺失和重复的现象。

技术领域

本发明涉及核酸领域，具体而言，涉及一种提取全血中基因组DNA的方法和试剂盒。

背景技术

我国每年的新生儿中，发生出生缺陷的比例约为5.9％，缺陷患儿的出生为家庭带来了巨大的精神负担和经济压力；且随着孕妇年龄的增加，缺陷胎儿的患病率显著提高，而70％出生缺陷是可以预先经检测发现的。与传统的产前筛查如血清学筛查和穿刺诊断方法相比，基于孕妇外周血进行的无创产前基因检测具有无创、安全、准确、检测周期短等优点，并且能够有效避免侵入性产前检测带来的流产和感染风险。

NIPT通过提取血浆游离DNA从而对胎儿基因组进行检测，但是检测都是在较高的母体DNA背景下进行的，容易引起假阳性或假阴性结果。为了尽可能消除母体DNA背景干扰，提高诊断的准确率，除血浆游离DNA外，通常还需要同时对孕妇的白细胞DNA进行提取和分析，以排除假阳性和假阴性结果。为减少孕妇的负担，目前使用游离DNA采血管进行血液采集，上层血浆检测游离DNA，下层的白细胞用于母体DNA检测。

目前，市面上针对白细胞基因组DNA的提取试剂盒主要包括以下步骤：裂解红细胞，得到较为纯净的白细胞；裂解白细胞，促进蛋白质与DNA的解离；纯化获得纯净的基因组DNA；溶解DNA，洗脱获得基因组DNA溶液。

然而所得白细胞检测后发现，正常人的染色体结果异常。这种异常表现为在多条染色体出现大量的非特异性的染色体片段拷贝数增加与缺失，剂量偏高和偏低，与临床实际结果不符，影响对检测结果的有效判断。

如图1所示，当-3<Z值<3时(染色体的Z值用于描述染色体的值与正常人平均值之间的距离，是衡量染色体是否异常的一个标准)，即在虚线框中的范围内时，染色体为数值为正常，超出这个范围即认为染色体异常。从图1可以看出，这个健康人的样本仅有两条染色体的Z值在正常范围内，而其余的染色体均发生较严重的异常。图2是图1的另一种展示方式，横坐标表示每一条染色体的位置，纵坐标代表测序数据中每个位点比对成功的reads数。正常样本的每条染色体应该呈现一条较均一的直线，而非图2框中所示的波浪形(见图3中对图2框中部分的放大效果图)。

综上可知，现有的全血基因组DNA的提取方法难以解决检测结果中出现上述多条染色体大量片段拷贝数增加或减少的假阳性的问题。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种提取全血中基因组DNA的方法和试剂盒，以降低检测结果中出现的假阳性问题。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种提取全血中基因组DNA的方法，该方法包括：从全血中分离出白细胞；对白细胞进行打断，得到打断后的白细胞；对打断后的白细胞进行细胞裂解和DNA-蛋白质解交联，得到基因组DNA。

进一步地，从全血中分离出白细胞的步骤包括：向全血中加入红细胞裂解液，得到裂解浆液；对裂解浆液进行过滤，得到白细胞。

进一步地，对白细胞进行超声打断，得到打断后的白细胞；优选地，超声打断的条件为：功率为10～50％，超声5～40秒，暂停5～30秒，总时间为0.5～1小时。