[发明专利]西尼罗河病毒荧光PCR检测试剂盒在审
| 申请号： | 201811585660.5 | 申请日： | 2018-12-25 |
| 公开（公告）号： | CN109371175A | 公开（公告）日： | 2019-02-22 |
| 发明（设计）人： | 不公告发明人 | 申请（专利权）人： | 江苏和创生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/93 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 212009 江苏省镇江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 西尼罗河病毒 试剂盒 荧光PCR检测试剂 荧光PCR技术 特异性检测 病毒核酸 疾病监测 快速检测 临床诊断 检测 核酸 拷贝 灵敏 鉴别 应用 | ||
1.一种用于特异性检测样品中西尼罗河病毒的试剂盒，其中包括PCR反应液、酶混合液、阴性质控品和阳性质控品,PCR反应液中用于核酸扩增反应的引物序列如下：
P1：5`-CCTGTGTGAGCTGACAAACTTAGT-3`，
P2：5`-GCGTTTTAGCATATTGACAGCC-3`，
PCR反应液中用于荧光信号监测的寡核苷酸探针的序列如下：
Probe1：5`-X1-CCTGGTTTCTTAGACATCGAGATCTTCGTG-Y1-3`，
Probe1荧光报告基团X1为FAM，荧光淬灭基团Y1为Eclipse。
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征还在于PCR反应体系为20 µl，包括2×PCR缓冲液10 µl、10mmol/L dNTP 1.0 µl、25µmol/L引物各0.5 µl、10µmol/L 探针0.2 µl、逆转录酶和热启动Taq酶混合液0.8µl、样品RNA 2 µl，加灭菌水至终体系20 µl。
3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征还在于PCR反应循环参数为：
逆转录阶段：42℃，10min；预变性阶段：94℃，10sec；预扩增阶段：变性 94℃，5sec；退火 50℃，20sec；延伸 72℃，20sec；共5个循环；注意本阶段不采集荧光信号；
检测阶段：变性 94℃，5sec；退火 56℃，50sec；延伸 72℃，15sec；共40个循环；在退火步骤检测荧光信号。
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