[发明专利]西尼罗河病毒荧光PCR检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种采用荧光PCR技术特异性检测样品中西尼罗河病毒核酸存在的试剂盒。利用本发明的试剂盒，可快速检测样品中是否存在西尼罗河病毒核酸，该试剂盒能够灵敏地检测并鉴别样品中存在的西尼罗河病毒，其检测下限为10拷贝每反应体系，在疾病监测、临床诊断等领域具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及一种采用荧光PCR技术特异性检测样品中西尼罗河病毒核酸存在的试剂盒，属于西尼罗河病毒的体外诊断领域。

背景技术

西尼罗河病毒（West Nile Virus，WNV）属于黄病毒科黄病毒属，与乙型脑炎、黄热病、丙型肝炎等病毒同属。有囊膜，核酸为单链RNA，具有感染性。西尼罗河病毒是一种脑炎病毒，以鸟类为主要的贮存宿主，马、蚊子和人都可以是它的传染宿主，人的发病时间较鸟类感染时间晚33天左右。

所有未接触过西尼罗河病毒的人都是易感者，老年人和免疫力弱者易发病、病死率高。西尼罗河病毒感染的潜伏期一般为3~12天。绝大多数(80%)为隐性感染，不出现任何症状，少数人表现为西尼罗河热，病人出现发热、头疼、肌肉疼痛、恶心、呕吐、皮疹、淋巴结肿大等类似感冒症状，持续3~6天。极少数人(1%)感染后表现为西尼罗河病毒性脑炎、脑膜脑炎和脑膜炎。

在实验室检测中，PCR法由于其快速简便的特点逐渐呈现出要替代以病毒培养和血清学检测为主的传统检测方法的趋势。而对于PCR方法来说，引物的特异性是其检测的特异性和敏感性的基础。

本发明针对西尼罗河病毒特异的靶序列设计引物和Taqman探针，利用real-timeRT-PCR的方法，用来鉴别检测样品中西尼罗河病毒核酸，可以快速获得特异性检测结果。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是快速准确地检测样品中是否存在西尼罗河病毒，提供一种特异性检测西尼罗河病毒的荧光PCR试剂盒。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

一种特异性检测样品中西尼罗河病毒的试剂盒，组分包括PCR反应液、酶混合液、阴性质控品和阳性质控品。其中PCR反应液主要含有相关的引物和探针、反应缓冲液、Mg2+和dNTP等，酶混合液主要含有逆转录酶和热启动Taq酶，阴性质控品为无RNase和DNase水，阳性质控品为含有西尼罗河病毒检测靶序列的RNA。

PCR反应液中用于核酸扩增的引物为P1和P2，P1和P2为针对西尼罗河病毒基因组群特异性保守序列设计并经预实验筛选出的特异性引物；PCR反应液中用于荧光信号监测的寡核苷酸探针为Probe1，Probe1为针对西尼罗河病毒基因组群特异性保守序列设计并经预实验筛选出的特异性探针，其中荧光报告基团X1为FAM，荧光淬灭基团Y1为Eclipse（见表1）。

表1 检测西尼罗河病毒的引物和探针序列