[发明专利]一种石蜡切片组织核酸的快速自动化提取方法与试剂

权利要求书

1.一种石蜡切片组织核酸的试剂，其特征在于，包括脱蜡剂、蛋白酶溶液、裂解液、洗涤液A、洗涤液B和洗脱液；

所述脱蜡剂为D-柠檬烯；

所述蛋白酶溶液由5~20mg/ml蛋白酶K、0.1~0.8%SDS、0.2~9M尿素、5~200m M Tris-HCl、0.1~10m M EDTA.Na2组成；

所述裂解液由4.5M 硫氰酸胍、0.9%DTT、5%聚多卡醇、50m M柠檬酸钠缓冲液、4M尿素和0.5%SDS组成；

所述洗涤液A由2M硫氰酸胍、30%乙醇、0.25%SDS和2M尿素组成；

所述洗涤液B由80%乙醇、20m M氯化钠、2m MTris和0.1%Tween20组成；

所述洗脱液由10m M Tris-HCL和0.2m M EDTA组成。

2.根据权利要求1所述的石蜡切片组织核酸的试剂，其特征在于，所述蛋白酶溶液由20mg/ml蛋白酶K、0.2%SDS、6M尿素、20m M Tris-HCl、2m M EDTA.Na2、5Mm 氯化钙和防腐剂组成。

3.根据权利要求1所述的石蜡切片组织核酸的试剂，其特征在于，所述洗涤液A由2M硫氰酸胍,30%乙醇，0.25%SDS,2M尿素和色素组成，且洗涤液A其PH值为7.5。

4.根据权利要求3所述的石蜡切片组织核酸的试剂，其特征在于，所述色素为酚红。

5.根据权利要求1所述的石蜡切片组织核酸的试剂，其特征在于，所述洗脱液由10m MTris-HCL、0.2m M EDTA.Na2和0.2%对羟基苯甲酸甲酯组成。

6.根据权利要求1所述的石蜡切片组织核酸的试剂，其特征在于，所述的Tris-HCl其PH值为8.0。

7.一种石蜡切片组织核酸的快速自动化提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一，切下8片5~10 µm厚的包埋石蜡样本至1.5ml或2ml离心管中，如果包埋石蜡样本表面已经暴露于空气中，丢弃先前的2~3片；加入1~1.2ml D-柠檬烯，盖上盖子旋涡振荡10秒后室温高速离心1~5分钟；

步骤二，弃上清液，加入1~1.2ml无水乙醇，振荡混匀，室温高速离心1~5分钟，移弃上清，打开盖子，室温放置或37℃放置10min，直至剩余的乙醇挥发完全；

步骤三，组织消化：在脱蜡干燥的组织中加入200µl蛋白酶溶液，振荡混匀，70℃10~30分钟后90℃10~30分钟，瞬时离心去除管内壁水珠；

步骤四，转移液体至深孔板的第一列，吸打1~2次混匀后，然后加入310µl无水乙醇或异丙醇，上磁珠提取仪；

步骤五，磁珠提取仪自动运行裂解、吸附步骤、洗涤液A洗涤步骤及洗涤液B洗涤步骤，最后于洗脱液中加热洗脱；运行结束洗脱液为含有核酸模板，用于后续的分子生物学分析。

8.根据权利要求7所述的石蜡切片组织核酸的快速自动化提取方法，其特征在于，所述步骤四中的深孔板的第一列中加有400µl 裂解液和20µl磁珠。

9.根据权利要求7所述的石蜡切片组织核酸的快速自动化提取方法，其特征在于，所述步骤五中的吸附步骤中利用搅拌套反复搅拌5~20分钟；洗涤步骤中分别用洗涤液A与洗涤液B洗涤1~2次，洗涤时间为1~2分钟；洗脱步骤中洗脱液其加热洗脱温度为50~80℃，洗脱时间为3~10分钟。