[发明专利]山羊传染性胸膜肺炎支原体单克隆抗体制备方法在审
| 申请号： | 201811586850.9 | 申请日： | 2018-12-25 |
| 公开（公告）号： | CN110028580A | 公开（公告）日： | 2019-07-19 |
| 发明（设计）人： | 文正常;王璇;潘淑惠;吴玙彤 | 申请（专利权）人： | 贵州省畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C07K16/12 | 分类号： | C07K16/12;C12N15/06;G01N33/577;G01N33/569 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 李亮;程新敏 |
| 地址： | 550005 贵*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 单克隆抗体 山羊传染性胸膜肺炎 制备 支原体 杂交瘤细胞 腹水 抗原 免疫Balb/c小鼠 琼脂糖亲和层析 特异性抗体效价 预处理 重组蛋白纯化 特异性反应 间接ELISA 纯化蛋白 次亚克隆 骨髓细胞 小鼠腹腔 小鼠腹水 亚型鉴定 脾细胞 柱纯化 效价 接种 融合 检测 试验 | ||
【权利要求书】：
1.一种山羊传染性胸膜肺炎支原体单克隆抗体制备方法，其特征在于：采用山羊传染性胸膜肺炎支原体RPS11基因重组蛋白纯化抗原，按照常规方法免疫Balb/c小鼠，取其脾细胞与SP2/0骨髓细胞进行融合，经亚克隆获得杂交瘤细胞，将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中制备腹水，收集腹水经过预处理后选用Protein G-琼脂糖亲和层析柱纯化，经间接ELISA特异性抗体效价检测。
2.根据权利要求1所述的山羊传染性胸膜肺炎支原体单克隆抗体制备方法，其特征在于：所述RPS11蛋白抗原为羊传染性胸膜肺炎支原菌株基因重组质粒构建、全基因序列合成、大肠杆菌菌株转化、包涵体质粒表达纯化的重组pet28 α-RPS11蛋白，目的片段约400bp，序列编码为134个氨基酸；SDS-PAGE检测其筛选抗原表位集中区重组蛋白分子质量为19kDa，蛋白纯度为85％。
3.一种权利要求1的方法制备的单克隆抗体在制备山羊传染性胸膜肺炎检测诊断试剂中的应用。
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