[发明专利]抗体人源化改造方法

权利要求书

1.一种抗体人源化改造方法，其特征在于，使用N-糖苷酶处理抗体人源化改造过程中的经纯化后的IgG抗体蛋白；所述N-糖苷酶为PNGaseF酶，所述PNGaseF酶特异性识别蛋白中的序列Asn-X-Ser/Thr，去除糖基化的同时保留抗体蛋白中的二硫键；X代表除了脯氨酸外任意一种氨基酸。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PNGaseF酶为Rapid^TMPNGase F酶。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，PNGaseF酶处理的反应温度为37～55℃。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，反应温度为50℃。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，PNGaseF酶处理的反应时间为10～15min。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述去除糖基化是指去除暴露在抗体蛋白的CDR构象表面的N-糖苷残基。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，PNGaseF酶处理的酶切反应体系为：5ul反应底物，2ul Rapid PNGase F Buffer(5X)，3ul的DNase&RNase Free无菌水，1ul的Rapid^TMPNGase F酶，共计11ul的反应体系。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，PNGaseF酶处理完成之后用SDS-PAGE方法或质谱仪对酶切效果进行鉴定。

9.如权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于，所述方法用于以下用途：通过使用N-糖苷酶切除鼠源抗体可变区的N-糖苷以改造鼠源抗体的生物物理性质。

10.如权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于，所述方法用于以下用途：通过使用N-糖苷酶切除鼠源抗体可变区的N-糖苷以确认鼠源抗体所连接的N-糖苷是否参与与抗原的结合。

11.如权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于，所述方法用于以下用途：通过使用N-糖苷酶切除鼠源抗体可变区的N-糖苷以判断该鼠源抗体是否可以用于人源化。

12.如权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于，所述方法用于以下用途：通过使用N-糖苷酶切除鼠源抗体可变区的N-糖苷以简化人源化流程。

13.如权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于，所述方法用于以下用途：通过使用N-糖苷酶切除已人源化的抗体可变区的N-糖苷以改造人源化后的抗体的生物物理性质。