[发明专利]一种微生物发酵法制备咔唑霉素B的方法

权利要求书

1.一种微生物发酵法制备咔唑霉素B的方法，其特征在于发酵生产咔唑霉素B的菌为藤黄轮丝链霉菌菌株HY61；所述方法具体包括以下步骤：

(1)菌株活化：挑取藤黄轮丝链霉菌菌株HY61划线接种至固体斜面培养基，于恒温培养箱22～30℃培养5～7d，待斜面长出大量孢子用于转接液体种子；

(2)液体种子制备：挑取步骤(1)的活化菌株接种于装有种子培养基的容器中，纱布封口，于22-30℃，150～220r/min摇床振荡培养30～72h，长出大量菌丝球或菌丝体，得液体种子；

(3)液体发酵：按体积比10～20％接种量向发酵培养基接入步骤(2)制备的液体种子，转速200～850r/min，溶氧控制45～50％，温度22～28℃，待初始葡萄糖耗尽后流加葡萄糖溶液并维持一定浓度，发酵24h后补入咔唑霉素合成的前体物质，发酵过程中流加酸碱调节剂维持pH6.5～7.5，通气培养48～72h；发酵结束后用正丁醇萃取发酵液中的咔唑霉素B，测定发酵效价；

所述的固体斜面培养基：可溶性淀粉20g/L，KNO₃ 1g/L，MgSO₄ 0.5g/L，NaCl 0.5g/L，KH₂PO₄ 0.5g/L，FeSO₄ 0.01g/L，琼脂20g/L，pH7.2～7.4，121℃高压蒸汽灭菌20min；

所述的液体种子培养基：葡萄糖10g/L，酵母浸粉2g/L，蛋白胨5g/L，NaCl 5g/L，pH7.2～7.4，121℃高压蒸汽灭菌20min；

所述的发酵培养基：葡萄糖20g/L，蛋白胨5g/L，酵母浸粉2g/L，KNO₃ 0.4g/L，MgSO₄ 4g/L，KH₂PO₄ 0.5g/L，CaCl₂ 5mg/L，VB₁ 0.5mg/L,核黄素0.5mg/L，V_H 0.5mg/L，烟酸1mg/L，FeSO₄ 0.5mg/L，MnSO₄ 0.5mg/L，pH7.2～7.4，121℃高压蒸汽灭菌20min。

2.根据权利要求1所述的一种微生物发酵法制备咔唑霉素B的方法，其特征在于所述的发酵过程中酸碱调节剂为25％氨水、20％NaOH及10％的HCl中的一种。

3.根据权利要求1所述的一种微生物发酵法制备咔唑霉素B的方法，其特征在于所述的发酵过程中流加的葡萄糖液浓度为500g/L，流加方式为溶氧-stat或pH-stat方式。

4.根据权利要求1所述的一种微生物发酵法制备咔唑霉素B的方法，其特征在于所述的发酵过程中补加的咔唑霉素B合成的前体物质为L-色氨酸、丙酮酸或乙酸中的一种或多种组合。