[发明专利]一种合成索玛鲁肽的方法

说明书

本发明公开了一种合成索玛鲁肽的方法，属于多肽合成技术领域。本发明的方法包括如下步骤：以Fmoc‑Gly王树脂为固相合成起始载体，通过使用新型缩合剂T3P(1‑丙基磷酸酐)进行索玛鲁肽主链30个氨基酸的活化偶联，然后脱除主链Lys²⁶侧链保护基团，通过缩合剂T3P依次活化偶联Fmoc‑AEEA‑AEEA﹑Fmoc‑Glu‑OtBu﹑Oct‑Otbu进行缩合，得到索玛鲁肽全保护肽，经裂解沉淀，得到索玛鲁肽。本发明方法提升了氨基酸偶联效率，极大降低了索玛鲁肽合成过程中产生的消旋肽和缺失肽杂质，尤其是有效抑制或减少了与产品性质极为相近的缺失杂质(Lys²⁶侧链AEEA缺失)的产生，提高了粗品的纯度，降低了纯化的难度，利于进行工业化放大生产。

技术领域

本发明涉及一种合成索玛鲁肽的方法，属于多肽合成技术领域。

背景技术

索玛鲁肽，英文名Semeglutide，为丹麦诺和诺德公司自主研发的第二代长效GLP-1类似物(第一代为利拉鲁肽Liraglutide)，用于II型糖尿病的治疗，一周仅需注射一次；同时，索玛鲁肽还能通过控制食欲和减少食物摄入量，诱导减肥。从结构上看，Semeglutide是GLP-1(7-37)链上8位的Aib取代了Ala，34位的Arg取代了Lys，26位的Lys接上十八烷酸脂肪链。与Liraglutide相比，Semeglutide的脂肪链更长，疏水性增加，但是Semeglutide经过短链的PEG修饰，亲水性大大增强。PEG修饰后不但可以与白蛋白紧密结合，掩盖DPP-4酶水解位点，还能降低肾排泄，可延长生物半衰期，达到长循环的效果。索玛鲁肽具有降低血糖、减轻体重、促进胰岛细胞再生以及心血管系统保护等多种效应，临床应用前景广阔。

目前已报道的索玛鲁肽的合成方法主要采用固相合成，主要分为常规法和片段法，都有一定程度上的缺陷：比如中国专利CN106928343A中用到了Fmoc-Lys(Alloc)-OH，在最后的脱除中用到了重金属钯，后续重金属很难去除干净影响产品的品质；中国专利CN104356224A将修饰后的Lys接入主链，由于侧链基团大活性低，容易偶联不完全，且对于后续氨基酸的偶联也造成一定程度上的困难，产生大量的缺失肽和消旋肽等杂质肽，影响下游纯化；中国专利CN106749613A把肽链分为三个片段进行偶联，该方法浪费原料，且对于中间体片段需进行质量控制，步骤繁琐又增加了成本，得不偿失。

因此，急需一种简单而高效的索玛鲁肽的合成方法。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种索玛鲁肽的制备方法，本发明的方法采用缩合剂T3P，提升了偶联效率，减少了杂质的产生，提高了粗肽的纯度和收率，降低合成成本；且本发明采用Fmoc-AEEA-AEEA做原料，减少杂质的产生，进一步提高了粗品的纯度和收率。

本发明的第一个目的是提供一种合成索玛鲁肽的方法，包括如下步骤：

(1)通过固相合成法，按索玛鲁肽主链C端至N端肽序，采用缩合剂偶联体系进行氨基酸的活化偶联，得到索玛鲁肽主链肽树脂；其中，Lys²⁶采用Fmoc-Lys(R)-OH为原料，其中R为Dde或ivDde；

(2)取固相载体树脂，采用缩合剂偶联体系依次将Fmoc-AEEA和Fmoc-AEEA活化偶联得到Fmoc-AEEA-AEEA-树脂；

(3)将步骤(2)得到的Fmoc-AEEA-AEEA-树脂进行全保护裂解，得到Fmoc-AEEA-AEEA；

(4)脱除步骤(1)得到的索玛鲁肽主链肽树脂中Lys²⁶的保护基，然后采用缩合剂偶联体系依次偶联二肽片段Fmoc-AEEA-AEEA、Fmoc-Glu-OtBu和Oct-OtBu，得到索玛鲁肽全保护肽树脂；

(5)索玛鲁肽全保护肽树脂经裂解后得到索玛鲁肽。

进一步地，所述的缩合剂为1-丙基磷酸酐。