[发明专利]一种同时检测四环素类、林可霉素、氟苯尼考抗生素残留量的方法

权利要求书

1.一种同时检测四环素类、林可霉素、氟苯尼考抗生素残留量的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)制备蛋白芯片：将四环素类人工抗原、林可霉素人工抗原、氟苯尼考人工抗原在芯片载体上进行点样操作，恒温孵育固定，加入封闭剂继续恒温孵育，然后洗涤拍干；

(2)特异性结合反应：取步骤(1)制备所得蛋白芯片，向所有孔板内加入四环素类抗体、林可霉素抗体和氟苯尼考抗体的混合抗体进行反应；然后向部分反应孔内加入不同浓度梯度的混合标准品，剩余反应孔内加入待检测样品；再向所有孔板内加入纳米银标记的羊抗鼠IgG，贴上盖板膜后恒温振荡孵育，孵育完成后洗涤拍干；

(3)显色反应：向步骤(2)孵育后的孔板内加入纳米银增强显色液，恒温振荡孵育，然后用超纯水洗涤拍干；

(4)处理分析：利用可视化生物芯片扫描仪对步骤(3)处理后的蛋白芯片进行扫描，并利用芯片分析软件进行结果处理分析。

2.根据权利要求1所述的同时检测四环素类、林可霉素、氟苯尼考抗生素残留量的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述四环素类人工抗原、林可霉素人工抗原、氟苯尼考人工抗原是分别将四环素类，林可霉素，氟苯尼考小分子化合物通过共价键偶联到大分子上，所述大分子为牛血清白蛋白、鸡卵清白蛋白、血蓝蛋白或者高分子聚合物。

3.根据权利要求2所述的同时检测四环素类、林可霉素、氟苯尼考抗生素残留量的方法，其特征在于，四环素类小分子化合物与大分子共价键偶联方法采用戊二醛法；林可霉素、氟苯尼考小分子化合物与大分子共价键偶联方法采用丁二酸酐法。

4.根据权利要求1所述的同时检测四环素类、林可霉素、氟苯尼考抗生素残留量的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述芯片载体采用微孔板、玻片、膜或者高分子片基，制备四环素类、林可霉素、氟苯尼考抗生素人工抗原矩阵，每样重复1-10个点。

5.根据权利要求1所述的同时检测四环素类、林可霉素、氟苯尼考抗生素残留量的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述四环素类人工抗原、林可霉素人工抗原、氟苯尼考人工抗原的固定浓度为1:1-1:100稀释，点样量为10-100nL/点。

6.根据权利要求1所述的同时检测四环素类、林可霉素、氟苯尼考抗生素残留量的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述混合抗体和纳米银标记的羊抗鼠IgG每孔加入量为10-100μL，混合抗体浓度范围为1:10000-1:320000稀释，纳米银标记的羊抗鼠IgG浓度范围为1:2-1:128稀释；所述混合标准品和待检测样品每孔加入量为10-100μL，混合标准品浓度范围为0.1-5ng/mL。

7.根据权利要求1所述的同时检测四环素类、林可霉素、氟苯尼考抗生素残留量的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述纳米银增强显色液由显色液A和显色液B按体积比1:1混合得到，现配现用，用量为10-100μL/孔。

8.根据权利要求1所述的同时检测四环素类、林可霉素、氟苯尼考抗生素残留量的方法，其特征在于，步骤(1)恒温孵育条件为保持4-37℃孵育0.5-16h；步骤(2)和(3)恒温振荡孵育条件为保持4-37℃孵育5-60min。

9.根据权利要求1所述的同时检测四环素类、林可霉素、氟苯尼考抗生素残留量的方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)中，所述洗涤是指采用洗涤液洗涤2-4次，每次10-15s；步骤(3)中，所述洗涤是指采用超纯水洗涤2-4次，每次10-15s。

10.根据权利要求1所述的同时检测四环素类、林可霉素、氟苯尼考抗生素残留量的方法，其特征在于，所述待检测样品为乳制品、饲料、尿液、动物组织、血清、蜂蜜、蜂皇浆、鸡蛋或水产品。