[发明专利]一种同时检测四环素类、林可霉素、氟苯尼考抗生素残留量的方法

说明书

本发明公开了一种同时检测四环素类、林可霉素、氟苯尼考抗生素残留量的方法，采用间接竞争法反应原理，将四环素类、林可霉素、氟苯尼考的人工抗原以微阵列形式固定于微孔板底部，制备成微孔板生物芯片阵列，并依次与四环素类、林可霉素、氟苯尼考抗体和不同的标准品或样品反应，最后用银增强显色，并采用可视化芯片扫描仪对微孔板显色结果进行快速扫描成像，图像采用芯片分析软件处理。相比较于现有技术，本发明方法采用固定制备的人工抗原和标记抗体的方法，极大地减短了检测时间，提高了灵敏度，实验操作简单，提高了检测效率，对四环素类、林可霉素、氟苯尼考药物残留分析方法研究具有重要意义和很好的应用推广价值。

技术领域

本发明属于药物残留检测技术，特别是涉及一种同时检测四环素类、林可霉素、氟苯尼考抗生素残留量的方法。

背景技术

抗生素作为一种能够杀灭或抑制病原微生物的物质，广泛存在于人们的日常生活中。抗生素在很多产业有着大量的应用，比如乳制品业、养殖业、食品加工业等。随着这些产业的飞速发展，不可避免地导致了抗生素在食品中残留和存在抗生素滥用的现象。因此检测抗生素的残留量也变的很有意义。

目前，常见的抗生素残留包括四环素类、林可霉素、氟苯尼考等。四环素类(Tetracycline，TC)是一种广谱高效的抗菌药物，广泛应用于革兰阳性和阴性细菌、细胞内支原体、衣原体和立克次氏体引起的感染，还被大量用作生长促进剂投喂给动物。林可霉素(Lincomycin，LCM)，是林可链霉菌发酵产生的林可酰胺类抗生素。林可霉素抑制细菌的蛋白质合成，对大多数革兰阳性菌和某些厌氧的革兰阴性菌有抗菌作用。氟苯尼考通过抑制肽酰基转移酶活性而产生广谱抑菌作用，包括各种革兰氏阳性、阴性菌和支原体等。研究证明如果在畜禽饲料中长期添加抗生素类促生长剂，可诱导某些茵群产生一定程度的耐药性。因此抗生素在食品中残留问题引起各国的广泛关注，对于这些抗生素的检测方法也有很多种，例如微生物法、高效液相色谱、免疫学法等。

微生物法其测定原理是根据抗生素对微生物的生理机能、代谢等的抑制作用，来定性或定量确定样品中抗微生物药物残留，如纸片法(PD)、试纸法(STOP)等。这种方法的优点是费用低，一般实验室都能操作。缺点是时间长，显色状态判断通过肉眼判别易产生误差，对微量残留无法做出正确判断，特异性不够且操作复杂。液相色谱法、液相色谱-质谱联用法、气相色谱法等，这些方法的优点是能进行定性、定量的检测，具有较高的灵敏度，但缺点是前处理复杂，需要很高的成本，并且对于操作人员的技术要求也比较高，也无法做到快速检测，目前也没有相关的方法可以同时检测四环素类、林可霉素和氟苯尼考抗生素。酶联免疫分析法(ELISA)作为一种快速、方便、低成本、高通量的筛选手段是近年来发展起来的检测动物源性食品中的抗生素残留的一种方法，但是一次实验没法同时检测多种抗生素残留。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种利用可视化蛋白芯片分析技术对待测样品中四环素类、林可霉素、氟苯尼考抗生素残留含量的同时检测方法。

为了解决上述技术问题，本发明采取的技术方案如下：

一种同时检测四环素类、林可霉素、氟苯尼考抗生素残留量的方法，包括如下步骤：

(1)制备蛋白芯片：将四环素类人工抗原、林可霉素人工抗原、氟苯尼考人工抗原在芯片载体上进行点样操作，恒温孵育固定，加入封闭剂继续恒温孵育，然后洗涤拍干；

(2)特异性结合反应：取步骤(1)制备所得蛋白芯片，向所有孔板内加入四环素类抗体、林可霉素抗体和氟苯尼考抗体的混合抗体进行反应；然后向部分反应孔内加入不同浓度梯度的混合标准品，剩余反应孔内加入待检测样品；再向所有孔板内加入纳米银标记的羊抗鼠IgG，贴上盖板膜后恒温振荡孵育，孵育完成后洗涤拍干；

(3)显色反应：向步骤(2)孵育后的孔板内加入纳米银增强显色液，恒温振荡孵育，然后用超纯水洗涤拍干；