[发明专利]一种游离巯基的检测方法

权利要求书

1.一种游离巯基的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）反应液制备：称取硫酸钠，加水溶解，摇匀后，加入氢氧化钠调节pH至8.0，再加水定容，得到浓度为0.1mol/L的硫酸钠溶液；称取EDTA并添加至硫酸钠溶液中，混匀，得到浓度为1mmol/L的EDTA反应液；

2）工作液制备：按照每0.004g Ellman试剂对应1mL反应液，将Ellman试剂溶解于步骤1）制备的反应液中，配制浓度为10mmol/L的工作液；

3）标准品溶液制备：按照每13.17mg半胱氨酸盐酸盐对应50mL反应液，将半胱氨酸盐酸盐溶解于反应液中，制得浓度为1.5mM的标准品储备液，使用反应液梯度稀释得标准品溶液；

4）取样供试：取待测样品或标准品25μL，加入酶标仪的酶标孔板中，每个孔中加入255μL反应体系，混合均匀后室温孵育15min，其中，反应体系由反应液与工作液按照体积比1:50混合均匀后得到；

所述酶标仪包括外壳体（1）、测量室（2）、显示器（3）、光电转换机构，外壳体（1）呈长方体状，测量室（2）贯穿外壳体（1）的一侧的顶部，显示器（3）设于外壳体（1）的另一侧顶部，光电转换机构设于外壳体（1）的内部；

所述测量室（2）包括：上盖板（21）、检测腔室（22），上盖板（21）盖合在检测腔室（22）上，上盖板（21）与检测腔室（22）的横截面均呈长方形，上盖板（21）长度方向的两侧外缘底部设有密封片（23）；

所述上盖板（21）宽度方向的两侧设有滚动齿轮（24），两侧对应的滚动齿轮（24）的中轴线处设有滚动轴承（25）；检测腔室（22）内设置有直行齿条（26）、滑轨（27）、温度感应器（28），直行齿条（26）设于检测腔室（22）宽度方向的两端，直行齿条（26）的路径上间隔设置有齿轮卡合腔（32），直行齿条（26）与滚动齿轮（24）相啮合；通过直行齿条（26）与滚动齿轮（24）的啮合，上盖板（21）可以沿直行齿条（26）的路径滑动，当上盖板（21）完全盖合在检测腔室（22）上时，滚动齿轮（24）卡合在齿轮卡合腔（32）内；

所述滑轨（27）平行设置在检测腔室（22）内，工作台（29）设置在滑轨上，工作台（29）底部的两侧设有与滑轨（27）滑动配合的滑块；滑轨（27）的两侧设有用于限制工作台（29）移动的限位块（30）；温度感应器（28）设置在工作台（29）的两侧；

所述工作台（29）上设置有检测孔（31），检测孔（31）上插接有与其间隙配合的酶标孔板（7）；

所述酶标孔板（7）包括孔板主体（71）、微孔杯（72）、定位框架，微孔杯（72）呈8×12的矩形阵列分布；

所述定位框架包括一体成型的微孔环（73）、横向连接件（74）、纵向连接件（75），微孔环（73）与微孔杯（72）一一对应且与微孔杯（72）间隙配合，横向相邻的微孔环（73）之间连接有横向连接件（74），纵向相邻的微孔环（73）之间连接有纵向连接件（75）；

所述横向连接件（74）与纵向连接件（75）结构相同，均包括第一连接件（741）、第二连接件（742），第一连接件（741）与第二连接件（742）均呈由外侧向内侧逐渐变窄的内凹状，第一连接件与第二连接件上由外侧至内侧设有若干个贮液孔（76），贮液孔（76）的数量由外侧到内侧逐渐减少，贮液孔（76）之间分布有导热丝（77）；

所述光电转换机构包括由上到下依次排列的光源（13）、上透镜（8）、中间透镜（9）、滤光片（10）、下透镜（11）、光电池（12），光电转换机构的数量为八组，每组光电转换机构的光源（13）、上透镜（8）、中间透镜（9）和下透镜（11）的光学中心排列在一条直线上，每组光电转换机构的滤光片（10）固定在同一个滤光片架上；

该酶标仪的工作方法如下：

（1）将待测样品加入微孔杯中，待加入完毕后，将酶标孔板放入工作台上，上盖板通过其上的滚动齿轮沿与之啮合的直行齿条滑动，当滚动齿轮滑动到齿轮卡合腔内时，上盖板与检测腔室紧密盖合，同时密封片对检测腔室长度方向的外侧进行密封；

（2）处理器控制导热丝的加热，迅速对微孔杯进行升温，温度感应器进行温度的感应，并将温度数据发送给处理器，处理器进一步对升温的速率进行调控，当达到设定温度时，处理器控制导热丝停止加热；

（3）光源发出光之后，垂直向下经过上透镜，经过聚光，焦点落于微孔杯内部中心位置，之后光束开始发散，穿过微孔杯底部到达中间透镜，之后形成平行光束，照射到滤光片上，得到单一波长的光，然后到达下透镜，再一次聚光，汇聚后被光电池吸收，进而转换为电信号，发送到处理器进行分析处理；

（4）当检测完毕后，需要整体更换清洗时，直接将酶标孔板取下清洗，清洗液可以进入贮液孔内，贮液孔内的清洗液可以净化后再次使用；若只使用部分微孔杯，只需要对部分微孔杯进行清洗更换，进行清洗更换时，只需将微孔杯从微孔环上取下即可；

（5）测定计算：将待测样品或标准品在412nm处测定吸光度，以标准品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，通过该标准曲线计算待测样品浓度。

2.根据权利要求1所述的游离巯基的检测方法，其特征在于，所述密封片（23）的形状为波浪状、圆角梯形状或半椭圆形状，材质为弹性橡胶或聚四氟乙烯薄膜。