[发明专利]以外泌体为载体的肿瘤靶向热疗材料的制备方法及其产品

说明书

本发明提供一种以外泌体为载体的肿瘤靶向热疗材料的制备方法，以肺癌细胞A549分泌的外泌体为载体，通过超高速离心法提取所述的外泌体，将合成的金纳米棒与外泌体共孵育，得到具有光热疗效对肺癌具有靶向性的纳米复合材料。本发明利用纳米金棒在近红外下所产生的光热效应，使组织升温，加速肺肿瘤细胞死亡，肺癌细胞分泌的外泌体使材料在生物体的具有良好的生物相容性及肺癌细胞靶向性，可用于肿瘤靶向热疗的材料，以有效提高热疗效果。

技术领域

本发明涉及一种具有主动靶向性复合材料的制备领域，具体涉及一种以外泌体为载体的肿瘤靶向热疗材料的制备方法及其产品。

背景技术

外泌体早在研究网织红细胞向成熟红细胞转变过程中被发现，细胞内晚期内涵体的界膜多处凹陷，向内出芽形成管腔状囊泡，从而转变为具有动态亚细胞结构的多囊泡体(multi-vesicle bodys，MVBs)。MVBs是真核细胞重要的蛋白运输与分拣中心，当MVB与胞膜融合后，其内的管腔状囊泡凹陷以内出芽方式形成颗粒状小囊泡，并释放入细胞外环境，即外泌体。研究表明，外泌体是一种富含多种生物活性因子的亚细胞双层膜囊泡，在促血管形成、促进细胞新生及免疫调节方面有重要作用。外泌体作为载体能逃避宿主免疫系统，被靶细胞特异性吸收，具有长的循环半衰期，无毒性，生物相容性好。

光热治疗作为一种治疗肿瘤的手段已开始进入临床。纳米光热治疗技术具有易于调控、毒副作用低、针对性强等优点，在肿瘤治疗、药物释控等领域展现出巨大的应用价值。

纳米金棒在近红外光照射下产生等离子共振效应产热使其在光热疗领域备受关注。由于在近红外区域，低的散射率和能量吸收使得在此区域内的组织最优传送，达到最大的穿过组织的最大深度和对非靶向组织最小的荧光强度。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明目的在于提供一种以外泌体为载体的肿瘤靶向热疗材料的制备方法。

本发明目的通过下述方案实现：一种以外泌体为载体的肿瘤靶向热疗材料的制备方法，以肺癌细胞A549分泌的外泌体为载体，将合成的纳米金棒与外泌体共孵育，得到具有光热疗效对肺癌细胞具有靶向性的纳米复合材料，包括以下步骤：

（1）纳米金棒的制备

在质量份数为5~50份蒸馏水中，加入摩尔比为0.1:1的高氯酸金和表面活性剂，搅拌均匀后加入还原剂，还原剂与高氯酸金的摩尔比为1:1，继续搅拌，当溶液由深棕黄色变为无色后，待溶液稳定后，加入质量份为0.1~2份的无机盐溶液，保持反应温度15~35℃，反应8~24 小时后，离心，蒸馏水洗涤3次，得到尺寸均匀长径比为1.8~6的纳米金棒；

（2）外泌体的提取

将A549肺癌细胞在5% CO₂细胞培养箱内37℃条件下培育并经多次传代，使用离心机将收集的培养液与细胞分离，取上清液在4℃条件下依次300g，2000 g，10000 g 离心0.5~4小时，以去除细胞与细胞碎片，再以 10000~100000 g 超速离心1~4小时达到分离、富集外泌体的目的，磷酸缓冲液（PBS）清洗可部分去除残存蛋白质；

（3）外泌体吞噬金棒

将得到的外泌体加入合成的纳米金棒在一定的条件下共孵育0.5~2小时，得到所需产物。

所述的表面活性剂为聚乙二醇辛基苯基醚、十六烷基三甲基溴化铵、聚氧乙烯中的一种。

所述的还原剂为硼氢化钠、柠檬酸三钠、维生素 C、硼氢化钾中的一种。

所述的无机盐为氯化钠、氯化镁、氯化钙、硫酸钠、硝酸钾、硝酸钠、硝酸银中的一种。

所述的共孵育条件为5% CO₂细胞培养箱内 37℃，常压条件下、5% CO₂细胞培养箱内 37℃条件下0.5Pa压力下条件的一种。