[发明专利]一种测定土霉素钙预混剂中土霉素含量的方法

说明书

本发明涉及一种测定土霉素钙预混剂中土霉素含量的方法，属于分析测试技术领域，该方法为高效液相色谱法，色谱条件如下：C18色谱柱；柱温：30‑40℃；检测波长：270‑380nm；流动相：浓度为2mmol/L的磷酸溶液与N,N‑二甲基甲酰胺按体积比780‑820:180‑220混合后形成的混合液；泵流量：0.8‑1.2mL/min；进样体积：20μL；运行时间：15‑25min。配制土霉素标准储备溶液、土霉素工作标准品溶液和土霉素供试品溶液，再按照上述色谱条件进行高效液相色谱分析，利用峰面积外标法进行土霉素含量计算。该方法重现性好、准确度高、较宽的线性测试范围及良好耐用性，检测速度及精度明显优于生测法。

技术领域

本发明属于分析测试技术领域，具体涉及一种测定土霉素钙预混剂中土霉素含量的方法。

背景技术

土霉素钙预混剂作为一种饲料添加剂，是土霉素生产菌的全发酵液与适量碳酸钙制成的土霉素钙盐，其活性成分为土霉素。

在兽药国家标准中，土霉素钙预混剂含量采用微生物检定法进行测定。实践表明，采用微生物法测定含量有几个弊端：1)方法的影响因素多，对含量测试的准确度有较大的影响；2)方法繁琐，耗时较长，造成工作效率低；3)测试成本较高。这些缺陷，制约着工业化生产土霉素钙预混剂生产进程和质量控制，造成生产效率低，质量控制不稳定。

鉴于上述情况，急需一种既能准确可靠检测土霉素钙预混剂含量检测，又能提高检测效率并降低检验成本的方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种测定土霉素钙预混剂中土霉素含量的方法。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1、一种测定土霉素钙预混剂中土霉素含量的方法，所述方法为高效液相色谱法，色谱条件为：

色谱柱：C18；

柱温：30-40℃；

检测波长：270-380nm；

流动相：浓度为2mmol/L的磷酸溶液与N,N-二甲基甲酰胺按体积比780-820:180-220混合后形成的混合液；

泵流量：0.8-1.2mL/min；

进样体积：20μL；

运行时间：15-25min。

优选的，所述高效液相色谱法具体包括如下步骤：

(1)配制土霉素标准储备溶液：取土霉素标准品用浓度为0.05mol/L的HCl溶液稀释配制浓度为500μg/mL的土霉素标准储备溶液，备用；

(2)配制土霉素工作标准品溶液：以步骤(1)中土霉素标准储备溶液为母液用浓度为0.05mol/L的HCl溶液稀释配制浓度为100μg/mL的土霉素工作标准品溶液，过0.22μm滤膜，备用；

(3)配制土霉素供试品溶液：取土霉素钙预混剂样品用浓度为0.05mol/L的HCl溶液稀释配制土霉素供试品溶液，过0.22μm滤膜，备用；所述土霉素供试品溶液中土霉素的理论浓度为0.4-500μg/mL；

(4)利用高效液相色谱仪测试：取相同体积的土霉素工作标准品溶液和土霉素供试品溶液，注入高效液相色谱仪，按照权利要求1所述的色谱条件进行高效液相色谱分析；

利用峰面积外标法进行含量计算，计算公式如下：

公式中：

A_供：为土霉素供试品溶液图谱中土霉素的峰面积；

A_工：为土霉素工作标准品溶液图谱中土霉素标准品的峰面积；