[发明专利]一种检测霉菌毒素的免疫层析试纸条的制备

权利要求书

1.一种检测玉米赤霉烯酮（ZEN）的胶体金免疫层析试纸条的制备及使用方法，其特征在于，将玉米赤霉烯酮半抗原通过戊二醛法分别与BSA和OVA偶联，得到玉米赤霉烯酮的偶联物ZEN-BSA和ZEN-OVA；将ZEN-BSA作为免疫原，采用常规方法制备高灵敏度的抗玉米赤霉烯酮的单克隆抗体；用柠檬酸三钠还原法制备35 nm的胶体金溶液，用该胶体金标记玉米赤霉烯酮的单克隆抗体，制备成玉米赤霉烯酮单克隆抗体胶体金标记物；将玉米赤霉烯酮单克隆抗体胶体金标记物用划膜仪喷在玻璃纤维素膜金标垫上，将ZEN-OVA偶联物、兔抗鼠的单克隆抗体分别喷涂在包被膜，即硝酸纤维素膜上，自然晾干或37℃烘干，组装成试纸条；将待测样品用甲醇提取，离心，取上清，将上清滴入试纸条的样本槽中，观察T线和C线的显色，得到检测结果。

2.根据权利要求1所述的一种检测玉米赤霉烯酮（ZEN）的胶体金免疫层析试纸条的制备及使用方法，其特征是，所述胶体金溶液制备：取1 L 三角烧瓶1个，加入超纯水495 mL，而后加入1%氯金酸(HAuCl₄·3H₂O) 5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况下加入1%柠檬酸三钠(Na₃C₆H₅O₇·2H₂O)溶液5-7 mL，继续加热搅拌，当溶液的颜色完全变为透明的紫红色时，维持5 min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2-8℃保存备用。

3.根据权利要求1所述的一种检测玉米赤霉烯酮（ZEN）的胶体金免疫层析试纸条的制备及使用方法，其特征是，所述玉米赤霉烯酮单克隆抗体胶体金标记物的制备具体为：将要标记的玉米赤霉烯酮抗体在1000 r/min, 4℃条件下，离心20 min，取上清，用0.01 mol/LPBS稀释成1 mg/mL；或者用0.01 mol/L PBS稀释成1 mg/ml，过0.22 µm滤膜；取权利要求2中的胶体金溶液40 mL，用0.25 mol/L K₂CO₃调节胶体金溶液pH至 8.5，电磁搅拌器250 r/min搅拌，逐滴加入4 mL 含0.3 mg 抗体蛋白溶液，反应10 min；逐滴加入4 mL 10% BSA，继续搅拌反应10 min；金标抗体溶液常温低速（1500 r/min）离心10 min，弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀；红色上清溶液4℃，12000 r/min 离心20 min，弃上清，收集沉淀，将沉淀用金标抗体稀释液定容至1 mL，制备成玉米赤霉烯酮单克隆抗体胶体金标记物。

4.根据权利要求1所述的一种检测玉米赤霉烯酮（ZEN）的胶体金免疫层析试纸条的制备及使用方法，其特征是，所述胶体金膜的制备：将权利要求3中的玉米赤霉烯酮蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物用划膜仪以5 µL/cm的浓度均匀喷在载体玻璃纤维素膜上，室温自然晾干或者37℃烘干3 h，制成含玉米赤霉烯酮蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物的胶体金膜。

5.根据权利要求1所述的一种检测玉米赤霉烯酮（ZEN）的胶体金免疫层析试纸条的制备及使用方法，其特征是，所述包被膜制备：将羊抗鼠IgG抗体、玉米赤霉烯酮蛋白质偶联物稀释成1 mg/mL，用划膜仪依次以1 µL/cm的浓度喷涂在硝酸纤维素膜上，制备成包被膜，37℃包被2 h后，室温自然晾干或者37℃烘干。

6.根据权利要求1所述的一种检测玉米赤霉烯酮（ZEN）的胶体金免疫层析试纸条的制备及使用方法，其特征是，所述甲醇为体积分数为70%的甲醇。

7.根据权利要求1所述的一种检测玉米赤霉烯酮（ZEN）的胶体金免疫层析试纸条的制备及使用方法，其特征是，所述试纸条的组装：PVC胶板自上而下依次粘贴样品垫、胶体金膜、包被膜和吸水棉，组装成试纸条，切割成一定宽度的长条。

8.根据权利要求1所述的一种检测玉米赤霉烯酮（ZEN）的胶体金免疫层析试纸条的制备及使用方法，其特征是，所述检测结果判断具体为：C线显色，T 线（检测线，靠近加样孔一端）显色，表明样品中不含玉米赤霉烯酮；C线显色，T线不显色，表明样品中含有玉米赤霉烯酮；未出现 C 线（对照线），可能是操作不当或检测卡已失效。