[发明专利]一种猪繁殖与呼吸综合症病毒重组质粒及其构建方法

说明书

本发明属于猪繁殖与呼吸综合症技术领域，具体公开一种猪繁殖与呼吸综合症病毒重组质粒及其构建方法。所述重组质粒为pZJ‑GP5‑2A‑M、pZJ‑GP5‑2A‑M‑2A‑IL‑18、pZJ‑GP5m、pZJ‑GP5m‑2A‑IL‑18或pZJ‑IL‑18，其中GP5m是指修饰型GP5。免疫兔子初步证实本发明构建的重组质粒可正确表达具有免疫原性的蛋白，可以有效诱导机体产生抗PRRSV特异性体液免疫和黏膜免疫反应。

技术领域

本发明属于猪繁殖与呼吸综合症技术领域，具体涉及一种猪繁殖与呼吸综合症病毒重组质粒及其构建方法。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合症（porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合症病毒（porcine reproductive and respiratory syndromevirus, PRRSV）引起的怀孕母猪在妊娠后期出现流产、早产或死产等繁殖功能障碍和新生仔猪呼吸功能障碍的一种高发性传染病，在我国各种类型猪场中广泛存在，严重制约我国养猪业发展。为了控制PRRS在世界上的流行和暴发，随着基因工程技术的发展，PRRS核酸疫苗成为目前基因工程疫苗研发的热点。PRRSV感染机体几天后可引起机体针对GP5和N蛋白的抗体反应，但这些抗体却并不具有中和病毒的作用，中和抗体则在机体感染病毒后四周才出现。

白细胞介素18（Interleukin,IL-18）是一种重要的免疫调节因子，主要由活化的单核巨噬细胞系统的细胞产生。IL-18具有多种生物学功能，不仅能增强Th1型免疫反应和Th2型免疫反应且可以诱导产生有效的黏膜免疫反应，在抗病原微生物感染和抗肿瘤方面有较大的应用潜能。IL-18作为天然的免疫调节剂和疫苗佐剂在一定程度上弥补了大多数免疫佐剂只能增强Th1型免疫反应的缺点，所以，已被公认为是一种可以代替传统疗法的新型细胞因子类免疫佐剂。

针对PRRSV感染机体后不能及时产生有效的中和抗体这一特点，研发能迅速刺激机体产生较高水平中和抗体的PRRS基因工程疫苗是未来疫苗的研究方向。

发明内容

本发明的目的在于提供一种猪繁殖与呼吸综合症病毒重组质粒及其构建方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

一种猪繁殖与呼吸综合症病毒重组质粒，所述重组质粒为pZJ-GP5-2A-M(共表达GP5、M)、pZJ-GP5-2A-M-2A-IL-18（共表达GP5、M、IL-18）、pZJ-GP5m（表达GP5m）、pZJ-GP5m-2A-IL-18（共表达GP5m、IL-18）或pZJ-IL-18（表达IL-18），其中GP5m是指修饰型GP5。

所述猪繁殖与呼吸综合症病毒重组质粒的构建方法：

（1）、设计PCR扩增GP5、G-GP5m、D-GP5m、G-2A-M、D-2A-M、2A-IL-18、IL-18的引物，分别为：

G-GP5m F：如SEQ ID No.1所示；G-GP5m R：如SEQ ID No.2所示；

D-GP5m F：如SEQ ID No.3所示；D-GP5m R：如SEQ ID No.4所示；

G-2A-M F：如SEQ ID No.5所示；G-2A-M R：如SEQ ID No.6所示；

D-2A-M F：如SEQ ID No.7所示；D-2A-M R：如SEQ ID No.8所示；

2A-IL-18 F：如SEQ ID No.9所示；2A-IL-18 R：如SEQ ID No.10所示；

GP5 F：如SEQ ID No.11所示；GP5 R：如SEQ ID No.12所示；