[发明专利]抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病的检测方法

权利要求书

1.一种抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病的动物模型，其特征在于，所述抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病的动物模型为：

SPF级雄性BALB/c小鼠40只，适应性喂养1周后，随机分为正常对照组、UC模型组、抗MIF单抗干预组、生理盐水组，每组10只；

正常对照组自由饮水，其余三组每日饮用5％DSS溶液连续7d；抗MIF单抗4mg/mL与生理盐水1:3体积比稀释后，抗MIF单抗干预组与生理盐水组于1、2、4、6d，分别腹腔注射抗MIF单抗和生理盐水0.2mL/只/天；造模及给药期间，观察并记录各组小鼠体重变化、精神状态、毛色、粪便性状。

2.一种利用权利要求1所述抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病的动物模型的抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病的检测方法，其特征在于，所述的抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病的检测方法，具有包括以下步骤：

步骤一：实验动物与分组：SPF级雄性BALB/c小鼠40只，适应性喂养1周后，随机分为正常对照组、UC模型组、抗MIF单抗干预组、生理盐水组，每组10只；

步骤二：模型制备及进行药物干扰，造模及给药期间，观察并记录各组小鼠体重变化、精神状态、毛色、粪便性状等一般情况，并根据Cooper的经典评分方法，进行疾病活动指数(DiseaseActivity Index，DAI)评分；

步骤三：对标本进行收集与处理，小鼠眼球取血采用ELISA检测MIF、TNF-a、IL-6；暴露结肠，对结肠进行大体损伤评分；镜下观察，高倍镜下选取3个不重叠视野，以胞质出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性细胞，计数各视野阳性细胞率；

步骤四：统计分析，所得数据资料均以(mean±SD)形式表示，采用SPSS18.0软件进行比较分析，多组间均数的比较采用单因素方差分析(One-wayANOVA)。

3.如权利要求2所述的抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病的检测方法，其特征在于，所述步骤一中，小鼠的鼠龄8～9周，体质量周，体质量(24±2)g。

4.如权利要求2所述的抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病的检测方法，其特征在于，所述步骤二中，模型制备与药物干扰，具体为：

正常对照组自由饮水，其余三组每日饮用5％DSS溶液连续7d；抗MIF单抗(4mg/mL)与生理盐水1:3体积比稀释后，抗MIF单抗干预组与生理盐水组于1、2、4、6d，分别腹腔注射抗MIF单抗和生理盐水0.2mL/只/天。

5.如权利要求2所述的抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病的检测方法，其特征在于，所述步骤三中，标本收集，具体包括：

(1)第8天断颈处死小鼠，小鼠眼球取血，离心取上清后于负80℃保存待测，采用ELISA检测MIF、TNF-a、IL-6；

(2)暴露结肠，截取盲肠末端至肛门的整个肠段，沿肠系膜纵轴切开，预冷生理盐水冲洗后，滤纸吸干，对结肠进行大体损伤评分。

6.如权利要求2所述的抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病的检测方法，其特征在于，所述步骤三中，标本处理，具体包括：

(1)一部分，置于冻存管液氮速冻后于负80℃保存，用于real time PCR检测NF-κB；

(2)另一部分，分别行HE染色镜下观察各组小鼠结肠组织病理改变并行组织学损伤评分；

(3)免疫组化染色镜下观察MIF、TNF-α、IL-6、NF-κB、IκB等促炎因子的表达水平。

7.如权利要求2所述的抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病的检测方法，其特征在于，所述步骤四中，组间两两比较采用t检验；p<0.05认为有显著性差异。