[发明专利]用于检测JAK2V617F突变的试剂盒

说明书

本发明提供了一种用于检测JAK2V617F突变的试剂盒及其制备方法和用途。所述试剂盒的用途包括：能够主要用于PV的诊断、鉴别以及临床的预后判断，一是早期发现和确诊及时进行干预，避免发展成出血或血栓；二是监测预后，延长患者寿命。本发明的试剂盒使用简便、检测效率高、结果可靠。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域的基因检测技术，尤其涉及一种用于检测JAK2V617F突变的试剂盒(荧光定量PCR法)。

背景技术

骨髓增殖性肿瘤(myeloproliferative neoplasm，MPN)是一组造血干细胞肿瘤增生性疾病，在骨髓细胞普遍增生的基础上有一个系列细胞尤其突出，呈持续不断的过度增殖。临床上根据增生为主细胞系列的不同分为4种：以红细胞系增生为主的真性红细胞增多症(polycythemia vera，PV)、以巨核细胞系增生为主的原发性血小板增多症(essentialthrombocythemia，ET)、以原纤维细胞增生为主的原发性骨髓纤维化(primarymyelofibrosis，PMF)和以粒细胞系增生为主的慢性粒细胞性白血病(CML)。

PV是一种克隆性的以红细胞异常增殖为主的慢性骨髓增生性肿瘤，PV是一种慢性疾病，其病程持续时间较长，年发病率为0.4～2.8/10万，在我国PV患者的数量还没有具体统计结果。PV患者的中位生存期约14年，年龄60岁患者为24年。PV起病隐袭，进展缓慢，通常经历以下两个进展阶段：①增殖期或红细胞增多期，常有红细胞增多；②红细胞增多后期，表现为全血细胞减少、髓外造血、肝脾肿大、脾亢和骨髓纤维化。

PV的常规诊断主要根据临床表现、实验室检查和病理形态学分析进行综合判断。由于反应性增生与MPN同样具有外周血细胞计数增加的实验室检查特征，加之MPN的临床症状不典型，对于不同类型的MPN与反应性增生之间的鉴别诊断一直是困扰临床的问题。2005年，JAK2 V617F点突变在MPN患者的骨髓和外周血中被发现，此突变是位于JAK2基因14外显子1849位碱基GT点突变，通过将617号密码子的缬氨酸置换为苯丙氨酸影响JH2结构域的活性，并导致JAK2自主抑制功能失调，在没有细胞因子刺激的条件下使JAK2仍能被激活并促进造血细胞增殖。JAK2V617F在PV中的突变率为95％，但至今在淋巴细胞疾病、实体肿瘤和反应性骨髓增殖性病变中尚未发现JAK2 V617F突变的报道。

2016年，WHO修订了PV主要诊断标准和次要诊断标准，已正式将JAK2基因突变检测纳入PV的主要诊断标准，PV诊断标准见表1。这些分子标志物的发现不仅有助于PV的诊断，还有助于判断临床转归和预后。如JAK2 V617F突变负荷越高，患者年龄越大，血红蛋白水平和白细胞计数则越高，血小板计数越低，脾大和皮肤瘙痒也越明显。随着JAK2 V617F突变负荷增高，PV患者发生血栓和继发PV后的骨髓纤维化的概率也显著增高。这些标志物的发现有助于对这类疾病患者进行诊断和治疗。

表1、WHO(2016)真红细胞增多症诊断标准

注：诊断需满足3项主要标准或前2项主要标准加次要标准。

PV引起的疾病及治疗：PV的临床表现是由于血容量増加以及血黏度的增加引起血流缓慢所致，常见的症状有头量、头疼、疲乏、气短、怕热、出汗、上腹饱胀、呼吸困难、肢体麻木，常有面部、手掌潮红等体征。也有患者无任何症状，于体检时发现。血栓(包括脑梗塞，深静脉血等)是真性红细胞增多症患者主要并发症，是影响PV患者生活质量和生存期的主要原因。大约10％PV患者疾病可向骨髓纤维化转变，极少数患者可进展为白血病。