[发明专利]采用磁珠混样处理DNA的测序文库标准化方法及试剂盒

权利要求书

1.一种采用磁珠混样处理DNA的测序文库标准化方法，其步骤如下：

1)消化过程：

对DNA文库中的DNA分子，利用外切酶从DNA分子末端消除碱基，暴露出黏性末端；

2)捕获过程：

2.1)磁珠和步骤1)获得的具有黏性末端的DNA分子结合，其中磁珠为已知用量的带有DNA结合片段的磁珠，所述DNA结合片段与DNA分子黏性末端特异性结合；

2.2)利用DNA聚合酶补齐黏性末端上可能存在的缺口或者切掉Flap DNA结构，再用DNA连接酶将缺刻连接起来；

3)漂洗过程：

将已捕获DNA分子的磁珠吸附在磁力架上，使用磁珠漂洗缓冲液洗掉未结合的DNA分子；

4)混样：

针对多个不同样本DNA文库，通过的重复步骤1)～3)以获得已捕获不同DNA分子的多种磁珠，并按照相同或相似的量将多种磁珠混合在一起；

5)洗脱：

使用DNA洗脱液和内切酶从步骤4)获得的混合的多种磁珠上洗脱DNA分子，得到可上机测序的文库样本。

2.根据权利要求1所述采用磁珠混样处理DNA的测序文库标准化方法，其特征在于：所述磁珠为链霉素亲和磁珠，它通过生物素与DNA结合片段相连。

3.一种采用磁珠混样处理DNA的测序文库标准化试剂盒，它的应用对象为具有黏性末端的DNA分子，包括如下组分：

(1)用于结合生物素修饰的DNA分子的链霉素亲和磁珠；

所述链霉素亲和磁珠通过生物素修饰分子结合有DNA结合片段，所述DNA结合片段包括特殊修饰碱基、DNAlinker、用于结合目标DNA分子的特异性DNA序列；

所述特殊修饰碱基为用于在特殊条件下释放目标DNA的碱基；

所述DNAlinker的长度为1～100bp；

所述特异性DNA序列的长度为长度3～200bp；

(2)工具酶

所述工具酶包括外切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、DNA内切酶；

(3)工具酶反应体系

各个工具酶对应的反应所需要的缓冲液；

(4)磁珠漂洗缓冲液

所述磁珠漂洗缓冲液用于漂洗磁珠，洗掉未结合的DNA分子；

(5)DNA洗脱液

所述DNA洗脱液用于从磁珠上洗脱目标DNA分子。

4.根据权利要求3所述采用磁珠混样处理DNA的测序文库标准化试剂盒，其特征在于：

所述DNA结合片段从5’到3’依次为DNAlinker、特殊修饰碱基、特异性DNA序列。

5.根据权利要求3所述采用磁珠混样处理DNA的测序文库标准化试剂盒，其特征在于：所述外切酶，选自Exo I,Exo III,Exo T5,lambda Exo，ExoT7；

所述DNA聚合酶，选自Taq聚合酶、B家族DNA聚合酶；

所述DNA连接酶，选自T4DNA连接酶、T7DNA连接酶、TaqDNA连接酶、E.coli DNA连接酶；

所述DNA内切酶，选自UDG、EndoVIII、EndoIV、Fpg。

6.根据权利要求3所述采用磁珠混样处理DNA的测序文库标准化试剂盒，其特征在于：所述特殊修饰碱基还包括用于防止链延伸的碱基和/或防止目标DNA文库的3’端OH延伸的碱基。

7.根据权利要求3所述采用磁珠混样处理DNA的测序文库标准化试剂盒，其特征在于：所述特殊修饰碱基为dUTP、8-oxo-dGTP、dITP、AP位点、RNA碱基。