[发明专利]采用磁珠混样处理DNA的测序文库标准化方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种采用磁珠混样处理DNA的测序文库标准化方法及试剂盒，本发明利用固定数量的磁珠捕获DNA分子，使得获取固定量的DNA分子变得容易，后续的混样中只需要按照DNA分子摩尔比例分配每个样本的上机测序数据即可，省去了前期处理的测DNA浓度，测DNA文库摩尔浓度等繁琐的步骤，大大简化了多个不同样本DNA文库上机测序前的处理过程，可以实现自动化操作，成本低，实用性强。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地指一种采用磁珠混样处理DNA的测序文库标准化方法及试剂盒。

背景技术

现有的自动化上机测序文库的标准化操作中，多个不同样本DNA文库构建成功后，需要按照DNA分子摩尔比例分配每个样本的上机测序数据。具体地讲，一般地的上机测序过程是：DNA文库先经过qubit测定DNA浓度、qPCR测定DNA文库摩尔浓度、Bioanalyzer分析DNA分子片段大小等检测后，确定DNA库准确的分子摩尔量；一张测序芯片lane的总数据量是一定的；如果多个样品DNA预期获取的测序数据量不同，那么要获得准确的下机测序数据就需要准确分配每个样品DNA的摩尔比例即可。目前上述方法存在几个大问题：需要大量检测实验、较多的人工操作、不能自动化操作、成本高等。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种可以不依赖繁琐的检测步骤、包含较少人工干预、可以实现自动化操作的采用磁珠混样处理DNA的测序文库标准化方法及试剂盒，大大提高工作效率、显著降低成本。

为实现上述目的，本发明提供了一种采用磁珠混样处理DNA的测序文库标准化方法，其步骤如下：

1)消化过程：

对DNA文库中的DNA分子，利用外切酶从DNA分子末端消除碱基，暴露出黏性末端；

2)捕获过程：

2.1)磁珠和步骤1)获得的具有黏性末端的DNA分子结合，其中磁珠为已知用量的带有DNA结合片段的磁珠，所述DNA结合片段与DNA分子黏性末端特异性结合(DNA结合片段所包含的序列可以特异性地与文库末端序列(如P5/P7序列)结合)；

2.2)利用DNA聚合酶补齐黏性末端上可能存在的缺口或者切掉Flap DNA结构，再用DNA连接酶将缺刻连接起来；

3)漂洗过程：

将已捕获DNA分子的磁珠吸附在磁力架上，使用磁珠漂洗缓冲液洗掉未结合的DNA分子；

4)混样：

针对多个不同样本DNA文库，通过的重复步骤1)～3)以获得已捕获不同DNA分子的多种磁珠，并按照相同或相似的量将多种磁珠混合在一起；

5)洗脱：

使用DNA洗脱液和内切酶从步骤4)获得的混合的多种磁珠上洗脱DNA分子，得到可上机测序的文库样本。

上述方案中，所述磁珠为链霉素亲和磁珠，它通过生物素与DNA结合片段相连。

本发明还提供了一种采用磁珠混样处理DNA的测序文库标准化试剂盒，它的应用对象为具有黏性末端的DNA分子，包括如下组分：

(1)用于结合生物素修饰的DNA分子的链霉素亲和磁珠；

所述链霉素亲和磁珠通过生物素修饰分子结合有DNA结合片段，所述DNA结合片段包括特殊修饰碱基、DNAlinker、用于结合目标DNA分子的特异性DNA序列；

所述特殊修饰碱基为用于在特殊条件下释放目标DNA的碱基；

所述DNAlinker的长度为1～100bp；