[发明专利]一种埃替格韦中硫酸二甲酯含量的测定方法

说明书

本发明公开了一种埃替格韦中硫酸二甲酯含量的测定方法，该方法采用化学衍生并结合高效液相色谱‑质谱联用仪测定埃替格韦中硫酸二甲酯的含量。该分析方法与现有技术相比具有专一性好,重现性好，灵敏度极高，适合做痕量分析等特点。

技术领域

本发明涉及采用化学衍生并结合高效液相色谱-质谱联用仪测定出埃替格韦中硫酸二甲酯的含量。此方法能较好的测定埃替格韦中痕量硫酸二甲酯含量，为患者的健康安全用药提供保障，属于医药技术领域。

背景技术

埃替格韦，化学名Elvitegravir。

是一种HIV整合酶抑制剂，通过阻断病毒整合至人体细胞基因组，干扰HIV病毒的复制，用于无任何已知Elvitegravir抗性相关突变的HIV-1成人感染者的治疗。埃替格韦结构如下：

埃替格韦中含有反应残留的硫酸二甲酯，结构如下：

准确定量地测定埃替格韦中硫酸二甲酯含量极具挑战性。硫酸二甲酯极性很大,不具备敏感的紫外吸收基团,并且易水解。因此,很难采用气相、液相色谱和其它分析手段对其进行痕量直接测定。

目前，没有测定埃替格韦中痕量硫酸二甲酯含量的方法，本发明采用化学衍生并结合高效液相色谱-质谱联用仪测定埃替格韦中硫酸二甲酯的含量。形成的衍生物具备优异的液相色谱分离和质谱检测等特征。该分析方法具有专一性好、灵敏度高、重现性好等特点。

发明内容

直接定量测定痕量硫酸二甲酯存在各种缺陷。然而,利用硫酸二甲酯带有甲氧基基团这一特征，可改造其特性使之转化为适合定量分析的分子结构。利用衍生试剂2-巯基吡啶能快速定量地同甲氧基基团发生化学反应的性质，而衍生试剂与硫酸二甲酯形成的衍生物具有稳定性强和非常适合反相液相色谱分离的特征。除此之外,该衍生物在质谱检测器有灵敏的吸收这一特征使本方法的灵敏度和专一性大大提高。衍生化学反应式如下：

通过实验发现埃替格韦在乙腈(Acetonitrile)中有非常好的溶解性。本发明将用乙腈(Acetonitrile)作为稀释剂。该分析方法的关键点是对稀释剂中水分进行严格控制。由于稀释剂中含有不确定量的水，这些水将使硫酸二甲酯水解产生不确定量的硫酸，从而使测定结果偏低、重现性较差。为了确保系统中水分含量恒定，并低于可接受的实验误差，本发明使用色谱级的乙腈。

在色谱级的乙腈溶剂中进行衍生反应能准确地定量埃替格韦中的硫酸二甲酯。

本发明采用的技术方案如下：

样品前处理：

稀释液：色谱级的乙腈。

衍生溶液：用稀释液配制成2-巯基吡啶的衍生溶液。

硫酸二甲酯衍生物标准溶液：用稀释液精密配制200.0ng/mL的硫酸二甲酯溶液。取等体积的该溶液和衍生溶液混合进行衍生后，进样。

供试品溶液：精密称取200.0mg供试品于10mL的容量瓶中，用稀释液溶解并定容至刻度，取等体积的该溶液和衍生溶液混合进行衍生后，进样。

本发明使用色谱柱为：十八烷基键合硅胶色谱柱。流速0.3-1.2mL/min。柱温25℃-45℃。流动相A：0.05％-0.2％挥发性酸水溶液，流动相B：乙腈，梯度如下：0min～8.0min，有机相比例由2％变为95％。质谱检测器：正离子模式，[M+H]⁺：126

附图说明：

附图1：根据本发明实施例一得到的硫酸二甲酯衍生物标准品质谱棒状图；

附图2：根据本发明实施例一得到的硫酸二甲酯衍生物标准品质谱总离子流图；