[发明专利]一种基于磷酸酯类载体的谷胱甘肽全合成方法

权利要求书

1.一种基于磷酸酯类载体的谷胱甘肽全合成方法，其特征在于步骤如下：

步骤1、载体偶联：以磷酸酯类载体替代固相树脂，在脱水偶联剂的作用下与氨基酸在0～50℃下搅拌反应1～3小时，得到生成物A；所述氨基酸与磷酸酯类载体的摩尔比为1～3:1；所述脱水偶联剂为1︰1摩尔比的脱水偶联活化剂和碱性物质；

所述氨基酸采用芴甲氧羰基(Fmoc)保护的甘氨酸(Fmoc-Gly-OH)，所述甘氨酸Fmoc-Gly-OH的C-端与磷酸酯类载体连接；

所述磷酸酯类载体的分子结构通式为：

步骤2、分离纯化：向生成物A加入极性小的烷烃或醚类溶剂，借助磷酸酯类载体在不同溶剂系统中易结晶沉淀的特性，可将生成物A与其他杂质分离；

对分离后的生成物A进行过滤和洗涤或重结晶操作得到纯化的生成物A；

步骤3、脱除N-端Fmoc：将纯化的生成物A采用脱Fmoc试剂处理，在10～50℃下搅拌反应0.5～2小时得到生成物B；

向生成物B加入极性小的烷烃或醚类溶剂，借助磷酸酯类载体在不同溶剂系统中易结晶沉淀的特性，可将生成物B与其他杂质分离；

对分离后的生成物B进行过滤和洗涤或重结晶操作得到纯化的生成物B；

步骤4：重复步骤1～步骤3，所述氨基酸采用半胱氨酸[Fmoc-Cys(Trt)-OH]；再重复步骤1～步骤3，所述氨基酸采用γ-谷氨酸[Fmoc-Glu(OH)-O^tBu]，依次偶联上侧链保护的半胱氨酸[Fmoc-Cys(Trt)-OH]和γ-谷氨酸[Fmoc-Glu(OH)-O^tBu]，脱Fmoc后得到化合物F；

步骤5、侧链脱保护：以三氟乙酸的有机溶液为侧链脱保护剂，反应条件为通氮气或氩气保护，-5～30℃下，搅拌1～2小时，同时脱除侧链上的保护基团Trt和tBu，得到化合物G；所述三氟乙酸的有机溶液中三氟乙酸与溶剂的体积比为1:1～4；

步骤6、剪除载体：将化合物G溶于溶剂中，以氢氧化锂的水溶液或钯-碳催化加氢作为剪除反应试剂，反应条件为通氮气或氩气保护，15～40℃下，搅拌1～3小时；反应完毕后，旋蒸回收溶剂；合并有机相回收磷酸酯类载体：残留溶液以乙酸乙酯萃取并与水相分离，萃取时加入极性小的烷烃或醚类溶剂；

所述加入氢氧化锂水溶液或钯-碳催化加氢，氢氧化锂的加量为化合物G的2-4倍当量；所述氢氧化锂水溶液的浓度为1～2M；

步骤7、谷胱甘肽的分离纯化：将步骤6所得的水相溶液用稀盐酸中和，调节pH＝5-6，沉淀析出，经过滤、重结晶、洗涤、干燥得到谷胱甘肽结晶H。

2.根据权利要求1所述基于磷酸酯类载体的谷胱甘肽全合成方法，其特征在于：所述步骤1的脱水偶联活化剂为乙炔胺类Ynamides、EDC、NHS、HOBt、HBTU、HATU、PyBOP、DCC或DIC。

3.根据权利要求1所述基于磷酸酯类载体的谷胱甘肽全合成方法，其特征在于：所述步骤1的碱性物质是无机碱或各种有机碱；

4.根据权利要求3所述基于磷酸酯类载体的谷胱甘肽全合成方法，其特征在于：所述无机碱为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠或碳酸钾。

5.根据权利要求3所述基于磷酸酯类载体的谷胱甘肽全合成方法，其特征在于：所述有机碱为TEA、DIEA、NMM，吡啶，DMAP中的一种或几种。

6.根据权利要求1所述基于磷酸酯类载体的谷胱甘肽全合成方法，其特征在于：所述步骤2、步骤3和步骤6中的极性小的烷烃或醚类溶剂为石油醚、正己烷、环己烷、乙醚、正丁醚中的一种或几种。

7.根据权利要求1所述基于磷酸酯类载体的谷胱甘肽全合成方法，其特征在于：所述步骤1反应中加入溶剂，采用氯仿CHCl₃、二氯甲烷DCM、N,N-二甲基甲酰胺DMF、N-甲基吡咯烷酮NMP、乙腈中的一种或几种。