[发明专利]一种基于SCoT标记的PCR扩增产物的分离方法在审
| 申请号： | 201811602186.2 | 申请日： | 2018-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN109609494A | 公开（公告）日： | 2019-04-12 |
| 发明（设计）人： | 史卫东;罗海玲;康红卫;熊发前;韦爱培 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 代芳 |
| 地址： | 530000 广西*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 差异片段 条带 琼脂糖凝胶电泳 基因工程技术 清晰 | ||
1.一种基于SCoT标记的PCR扩增产物的分离方法，其特征在于，采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离SCoT标记的PCR扩增产物。
2.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述非变性聚丙烯酰胺凝胶的原料为：Acr溶液、Bis溶液、10XTBE和ddH2O；
所述Acr溶液与Bis溶液、10XTBE、ddH2O的体积比为24:12.84:12:70.8；
所述Acr溶液的质量浓度为40％；
所述Bis溶液的质量浓度为2％；
所述10XTBE的pH值为8.3。
3.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述电泳的条件包括：所述电泳的电压功率为120w，所述电泳的时间为5h。
4.权利要求1～3任一项所述的分离方法在获取感虫菜心和抗虫菜心基因间差异片段中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述获取感虫菜心和抗虫菜心基因间差异片段使用的SCoT引物如SEQ ID No.1～20所示。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述获取感虫菜心和抗虫菜心基因间差异片段使用的PCR体系含有氯化镁、SCoT引物、dNTPs、taq DNA聚合酶和基因组DNA；
所述PCR体系中氯化镁的浓度为1.5mmol/L；
所述PCR体系中SCoT引物的浓度为0.5μmol/L；
所述PCR体系中dNTPs的浓度为0.5mmol/L；
所述PCR体系中taq DNA聚合酶活性为1.25U/20μL；
所述PCR体系中基因组DNA的含量为50ng/20μL。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述PCR体系扩增的程序包括：94℃4min；94℃30s，50℃60s，72℃1.5min，共35个循环；72℃5min。
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