[发明专利]一种基于SCoT标记的PCR扩增产物的分离方法

说明书

本发明提供了一种基于SCoT标记的PCR扩增产物的分离方法，涉及基因工程技术领域，采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳SCoT标记的PCR扩增产物，实现SCoT标记的PCR扩增产物的分离。根据本发明实施例和对比例可以得出，采用琼脂糖凝胶电泳对SCoT标记的PCR扩增产物分离，得到的条带较暗，不清晰，不能够准确鉴定差异片段；采用本发明提供的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对SCoT标记的PCR扩增产物的分离，得到较亮、清晰的条带，能够准确鉴定差异片段。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种基于SCoT标记的PCR扩增产物的分离方法。

背景技术

琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。蛋白质和核酸会根据pH不同带有不同电荷，在电场中受力大小不同，因此电泳速度不同，根据这个原理可将分子量不同的分子分开。电泳缓冲液的pH值在6～9之间，最适离子强度为0.02～0.05。常用1％的琼脂糖作为电泳支持物，琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段，普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb，其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围广。

目前SCoT标记的PCR扩增产物是通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，存在问题是SCoT标记的数量不多，琼脂糖凝胶电泳后的很多条带不清晰，测序结果不准确。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于SCoT标记的PCR扩增产物的分离方法，采用本发明提供的方法能够将SCoT标记的PCR扩增产物分离，且条带清晰，测序结果准确。

本发明提供了一种基于SCoT标记的PCR扩增产物的分离方法，采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离SCoT标记的PCR扩增产物，实现SCoT标记的PCR扩增产物的分离。

优选的，所述非变性聚丙烯酰胺凝胶的原料为：Acr溶液、Bis溶液、10XTBE和ddH₂O；

所述Acr溶液与Bis溶液、10XTBE、ddH₂O的体积比为24:12.84:12:70.8；

所述Acr溶液的质量浓度为40％；

所述Bis溶液的质量浓度为2％；

所述10XTBE的pH值为8.3。

优选的，所述电泳的条件包括：所述电泳的电压功率为120w，所述电泳的时间为5h。

本发明还提供了上述技术方案所述的分离方法在获取感虫菜心和抗虫菜心基因间差异片段中的应用。

优选的，所述获取感虫菜心和抗虫菜心基因间差异片段使用的SCoT引物如SEQ IDNo.1～20所示。

优选的，所述获取感虫菜心和抗虫菜心基因间差异片段使用的PCR体系含有氯化镁、SCoT引物、dNTPs、taq DNA聚合酶和基因组DNA；

所述PCR体系中氯化镁的浓度为1.5mmol/L；

所述PCR体系中SCoT引物的浓度为0.5μmol/L；

所述PCR体系中dNTPs的浓度为0.5mmol/L；

所述PCR体系中taq DNA聚合酶活性为1.25U/20μL；

所述PCR体系中基因组DNA的含量为50ng/20μL。