[发明专利]用于石油凝聚的微生物胞外多糖及其纯化方法

权利要求书

1.一种用于石油凝聚的胞外多糖的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.采用醇沉法和蛋白酶K-Sevag法酶解法纯化得到菌株CS07胞外多糖粗提液；

S2.将胞外多糖粗提液采用DEAE-52纤维素离子交换层析洗脱进行分离纯化，洗脱剂为去离子水，流速为1.2mL/min，得到组分EPS1，然后采用Sephadex G150凝胶渗透层析柱进一步对活性组分分离纯化，得到胞外多糖；

所述的菌株CS07 保藏编号为CGMCC No.12739。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S1包括：

取在LB培养基30℃，150r/min摇瓶培养7d的菌株CS07发酵液，121℃高压灭菌1h后，在4℃ 11000r/min离心1h，取上清，向沉淀中加入无菌水摇匀后，重复上述操作，上清液在100℃ 加热搅拌，浓缩至70mL；

向浓缩液中加入30mL无水乙醇，使乙醇终浓度为30%，密封瓶口，放置于4℃ 静置过夜，将过夜后的溶液在4℃ 11000r/min离心30min，弃白色沉淀，收集上清液；

（3）向上清液中加入无水乙醇，使乙醇终浓度达到80%，密封瓶口，放置于4℃ 静置24h，醇沉24h后瓶中会有沉淀吸附于瓶底，小心倾倒弃去全部上清液，以无菌水溶解沉淀；

（4）向溶液中加入0.1w/v%的蛋白酶K，60℃酶解3h后，加入1/5溶液体积的Sevag 试剂，搅拌20min；4℃ 11000r/min离心20min；小心收集上清液，弃去中间白色层及下层试剂；重复加入Sevag 试剂，离心，直至有机层无沉淀出现，收集合并上清液作为胞外多糖粗提液。

3.如权利要求1所述方法中制备的胞外多糖粗提液在石油凝聚上的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，取浓度为100mg/ml胞外多糖粗提液，向其中加入石油，胞外多糖粗提液与石油的体积比为（500-1000）：1。