[发明专利]一种利用CRISPR/Cas9系统构建致死基因全身性敲除小鼠模型的方法

权利要求书

1.一种利用CRISPR/Cas9系统构建致死基因全身性敲除小鼠模型的方法，包括以下步骤：

1)设计高效识别致死基因PAM区域的sgRNA序列；

2)将Cas9的mRNA或蛋白和步骤1)设计的sgRNA混合，将混合物对小鼠二细胞胚胎中的任意一个卵裂球细胞显微注射，注射后胚胎移植，品系基因鉴定，得到致死基因敲除的嵌合体阳性首建鼠；

3)阳性首建鼠与野生型鼠配种产生F1代，基因鉴定确认后最终得到致死基因全身性敲除的杂合子F1代鼠，完成可传代繁育的小鼠模型构建。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述致死基因为Actr6，Armc7，Armh3，Arpc3，Atad3a，Atp5e，Atp5f1，Atxn10，Cenpl，Chka，Chmp6，Copg1，Cpsf3，Crls1，Ctla-4，Ctr9，Dars2，Dctn1，Dctn4，Ddx55，Dhodh，Dhps，Dhx33，Dpm1，Dync1i2，Dynlrb1，Ears2，Elac2，Exoc3，Exosc9，Fdft1，Fignl1，Gbf1，Gtf2h2，Ints11，Ints2，Kif18b，L3mbtl2，Lars，Leo1，Lsm10，Mau2，Med19，Mrps21，Mrps5，Mtor，Nat10，Ndufb8，Nelfe，Nhlrc2，Nhp2，Npat，Nup85，Ogdh，Orc1，Pam16，Pdcd2，Pgap2，Pitrm1，Pold3，Polr2f，Polr3f，Polr3g，Rbm33，Rnasek，Rpia，Sap130，Setd1a，Sfpq，Slc17a5，Slu7，Smc3，Smg1，Srsf7，Supt5，Taf11，Tet3，Timeless，Tmem30a，Trub2，Usp37，Usp5，Virma，Vps33b，Wac等中的一种或几种。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述致死基因为Slc17a5和/或Virma。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述致死基因为Slc17a5，sgRNA序列如SEQID NO.1所示。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述致死基因为Virma，sgRNA序列如SEQID NO.2所示。

6.一种致死基因全身性敲除小鼠模型，其特征在于，所述小鼠模型由权利要求1-5任一所述的方法构建而成。

7.权利要求6所述小鼠模型在分析致死基因在机体内功能的科学研究及构建疾病模型用于药物筛选方面的应用。

8.一种构建致死基因全身性敲除小鼠模型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括致死基因PAM区域的sgRNA序列和Cas9的mRNA或蛋白。