[发明专利]一种小反刍兽疫重组融合蛋白及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201811605308.3 | 申请日： | 2018-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN109608552A | 公开（公告）日： | 2019-04-12 |
| 发明（设计）人： | 李晓光;刘毅 | 申请（专利权）人： | 杭州亿米诺生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/70;C12N15/62;G01N33/569 |
| 代理公司： | 杭州信义达专利代理事务所(普通合伙) 33305 | 代理人： | 施建勇 |
| 地址： | 310000 浙江省杭州市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 单链抗体 重组融合蛋白 抗原 抗原基因 制备方法和应用 合成核酸序列 生物医药领域 单克隆抗体 抗原决定簇 技术开发 融合表达 原核细胞 重组抗体 密码子 基因 调取 复性 构建 真核 制备 优化 查找 细胞 开发 | ||
1.一种小反刍兽疫重组融合蛋白，其特征在于:包括小反刍兽疫抗原和小反刍兽疫单链抗体:
所述小反刍兽疫抗原为含有主要抗原决定簇的N(425-525aa)抗原；
所述小反刍兽疫单链抗体为scFv。
2.一种基于权利要求1所述的一种小反刍兽疫重组融合蛋白的制备方法，其特征在于:包括以下步骤:
(1)查找小反刍兽疫中含有主要抗原决定簇的N(425-525aa)抗原；
(2)优化小反刍兽疫N(425-525aa)抗原基因的密码子，合成核酸序列并进行表达；
(3)构建针对小反刍兽疫N(13-20aa)抗原的单链抗体，调取单链抗体scFv的基因；
(4)重组优化的小反刍兽疫N(425-525aa)抗原基因和针对小反刍兽疫N(13-20aa)抗原的单链抗体scFv的基因，并进行融合表达；
(5)采用超声的方式破碎诱导表达之后的细菌，将破碎条件定为200w，每次超声6s，间隔3s超声一次，共180次，纯化及复性小反刍兽疫重组融合蛋白。
3.根据权利要求2所述的一种小反刍兽疫重组融合蛋白的制备方法，其特征在于:所述步骤(2)和步骤(4)在大肠杆菌系统中表达。
4.根据权利要求2所述的一种小反刍兽疫重组融合蛋白的制备方法，其特征在于:所述步骤(2)和步骤(4)表达时的诱导温度为20℃、25℃、28℃或37℃，诱导转速为250rpm，诱导的IPTG浓度为0.1mM。
5.根据权利要求2所述的一种小反刍兽疫重组融合蛋白的制备方法，其特征在于:所述诱导温度为25℃或37℃。
6.根据权利要求2所述的一种小反刍兽疫重组融合蛋白的制备方法，其特征在于:所述诱导温度为25℃。
7.根据权利要求2所述的一种小反刍兽疫重组融合蛋白的制备方法，其特征在于:所述步骤(5)的纯化方式选自离子交换层析、凝胶过滤层析或亲和层析。
8.根据权利要求2所述的一种小反刍兽疫重组融合蛋白及其制备方法，其特征在于:所述步骤(5)的纯化方式为亲和层析。
9.一种基于权利要求1所述的一种小反刍兽疫重组融合蛋白的应用，其特征在于:所述重组蛋白用于制备小反刍兽疫检测试剂盒。
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