[发明专利]一种小反刍兽疫重组融合蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种小反刍兽疫重组融合蛋白，涉及生物医药领域，包括小反刍兽疫抗原和小反刍兽疫单链抗体；一种小反刍兽疫重组融合蛋白的制备方法，包括以下步骤:(1)查找小反刍兽疫中含有主要抗原决定簇的N(425‑525aa)抗原；(2)优化小反刍兽疫N(425‑525aa)抗原基因的密码子，合成核酸序列并进行表达；(3)构建针对小反刍兽疫N(13‑20aa)抗原的单链抗体，调取单链抗体scFv的基因；(4)重组优化的小反刍兽疫N(425‑525aa)抗原基因和针对小反刍兽疫N(13‑20aa)抗原的单链抗体scFv的基因，并进行融合表达；(5)纯化及复性小反刍兽疫重组融合蛋白。本发明在开发单克隆抗体的基础上又进行重组抗体技术开发单链抗体，易于在细胞中表达，可以在真核或者原核细胞中表达，可大量生产，成本较低。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及一种小反刍兽疫重组融合蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

小反刍兽疫(peste des petits ruminants,PPR)俗称羊瘟,又名小反刍兽假性牛瘟、肺肠炎、口炎肺肠炎复合症,是由小反刍兽疫病毒引起的一种急性病毒性传染病。1978年印度发现PPR,2007年，中国西藏地区爆发PPR。由于其广泛的传播性、对经济的影响性及其在全球消除牛瘟的活动中所扮演的重要作用,PPR越来越受到重视。

体外诊断核心原料的开发是开发相应诊断试剂的前提，只有开发出具有高活性、高性能的抗原抗体，体外诊断试剂产品才能成为现实。因此，针对小反刍兽疫抗体和抗原开发出能够用以生产诊断试剂的原料迫在眉睫，从某种程度上说，原料的开发也必将成为降低小反刍兽疫病蔓延的首要解决问题。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种小反刍兽疫重组融合蛋白及其制备方法和应用。

本发明的技术方案:一种小反刍兽疫重组融合蛋白，包括小反刍兽疫抗原和小反刍兽疫单链抗体；

所述小反刍兽疫抗原为含有主要抗原决定簇的N(425-525aa)抗原；

所述小反刍兽疫单链抗体为scFv。

一种小反刍兽疫重组融合蛋白的制备方法，包括以下步骤:

(1)查找小反刍兽疫中含有主要抗原决定簇的N(425-525aa)抗原；

(2)优化小反刍兽疫N(425-525aa)抗原基因的密码子，合成核酸序列并进行表达；

(3)构建针对小反刍兽疫N(13-20aa)抗原的单链抗体，调取单链抗体scFv的基因；

(4)重组优化的小反刍兽疫N(425-525aa)抗原基因和针对小反刍兽疫N(13-20aa)抗原的单链抗体scFv的基因，并进行融合表达；

(5)采用超声的方式破碎诱导表达之后的细菌，将破碎条件定为200w，每次超声6s，间隔3s超声一次，共180次，纯化及复性小反刍兽疫重组融合蛋白。

前述的一种小反刍兽疫重组融合蛋白的制备方法中，所述步骤(2)和步骤(4)在大肠杆菌系统中表达。

在大肠杆菌中表达蛋白时，不同密码子使用的频率有较大区别，为了使重组蛋白的表达量达到最大，需将小反刍兽疫N(425-525aa)抗原基因序列进行密码子优化，然后合成优化后的核酸序列并进行表达。

前述的一种小反刍兽疫重组融合蛋白的制备方法，所述步骤(2)和步骤(4)表达时的诱导温度为20℃、25℃、28℃或37℃，诱导转速为250rpm，诱导的IPTG浓度为0.1mM。

前述的一种小反刍兽疫重组融合蛋白的制备方法，所述诱导温度为25℃或37℃。

前述的一种小反刍兽疫重组融合蛋白的制备方法和应用中，所述诱导温度为25℃。