[发明专利]鉴别HP-PRRSV和NADC30-like毒株的检测引物和探针、试剂盒及应用

权利要求书

1.鉴别HP-PRRSV和NADC30-like毒株的检测引物和探针，其特征在于，包括用于检测HP-PRRSV毒株的检测引物和探针以及用于检测NADC30-like毒株的检测引物和探针；其中：

用于检测HP-PRRSV毒株的检测引物和探针：

nsp2-HV-F:5′-CACCTTCCGTGAGTGCAGAG-3′(SEQ ID NO.1)；

nsp2-HV-R:5′-AATCAGTGAATGAGCCGACA-3′(SEQ ID NO.2)；

nsp2-HV-P:5′-FAM-GAGACACTGACGAGCTGCTTG-BHQ1-3′(SEQ ID NO.3)；

用于检测NADC30-like毒株的检测引物和探针：

nsp2-del-F:5′-CGAATGARCCTGTGCCTGTCCC-3′(SEQ ID NO.4)；

nsp2-del-R:5′-TTCCTTCCACCTGCTGAAGCCCAC-3′(SEQ ID NO.5)；

nsp2-del-P:5′-HEX-CCCTGTGCCCGCACCACGA-BHQ2-3′(SEQ ID NO.6)；

其中，R为A，G。

2.用于鉴别HP-PRRSV毒株和NADC30-like毒株的试剂盒，其特征在于，其包含权利要求1所述的检测引物和探针。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含用于25μL荧光定量RT-PCR反应体系的试剂：荧光定量一部分RT-PCR反应液2×One Step RT-PCR Buffer Ⅲ12.5μL，PrimeScript RT Enzyme Mix Ⅱ 0.5μL，TaKaRa Ex Taq HS 0.5μL，nsp2-HV-F(20μM)0.6μL，nsp2-HV-R(20μM)0.6μL，nsp2-HV-P(20μM)0.4μL，nsp2-del-F(20μM)0.6μL，nsp2-del-R(20μM)0.6μL，nsp2-del-P(20μM)0.4μL，Total RNA 5μL，RNase free H₂O 3.3μL。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括阳性对照标准品和阴性对照标准品。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照标准品为重组质粒pMD18-T-nsp2。

6.用于鉴别HP-PRRSV毒株和NADC30-like毒株的试剂盒的使用方法，包括如下步骤：

S1.提取待检样品的RNA；

S2.一步法RT-PCR，利用反转录过程将RNA反转录成cDNA，同时进行荧光定量PCR；

S3.对数据进行处理、判定检测结果。

7.根据权利要求6所述的使用方法，其特征在于，所述RNA提取是指用商品化病毒RNA试剂盒提取的RNA或用Trizol法提取的病毒RNA。

8.根据权利要求6所述的使用方法，其特征在于，所述荧光定量RT-PCR反应条件为：1个循环反转录50℃，30min；1个循环cDNA预变性95℃，1min；40个循环95℃，15sec；60℃，30sec，于60℃进行荧光信号采集。