[发明专利]鉴别HP-PRRSV和NADC30-like毒株的检测引物和探针、试剂盒及应用

说明书

本发明提供一种鉴别HP‑PRRSV和NADC30‑like毒株的检测引物和探针、试剂盒及应用，所述检测引物如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示，所述探针如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.6所示。本发明进一步公开了一种用于鉴别HP‑PRRSV毒株和NADC30‑like毒株的试剂盒，利用鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒HP‑PRRSV毒株和NADC30‑like毒株两种毒株。本发明引物及方法特异、快速、敏感，能够应用于猪繁殖与呼吸综合征病毒HP‑PRRSV和NADC30‑like两种毒株的鉴别检测。

技术领域

本发明具体涉及一种用于鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒HP-PRRSV毒株和NADC30-like 毒株的检测引物和探针、试剂盒及应用，属于猪繁殖与呼吸综合征病毒不同毒株的检测鉴别领域。

背景技术

2006年6月开始，我国南方部分省市猪群中发生了以体温高热不退、皮肤发红、呼吸困难为主要临床症状的疫情，并迅速传遍全国，给我国养猪业造成了巨大经济损失。经流行病学调查、病毒分离、基因分析、动物试验等，最终确定是由PRRSV变异株造成的，并定名为高致病性PRRSV(HP-PRRSV)。之后，HP-PRRSV长期在我国流行，并持续给我国养猪业造成了不可估量的损失。2014年底开始，起源于美国的PRRSV缺失株NADC30-like毒株在我国东部省份被鉴定到，并引发母猪严重的流产或早产，又一次严重打击了给我国养猪业。至此，我国临床猪场中PRRSV的流行以HP-PRRSV和NADC30-like两种毒株共同流行为主。

国内对于临床猪场中PRRSV的检测方法主要有Marc-145细胞传代检测法、酶联免疫吸附试验、RT-PCR技术、荧光抗体检测法、微量血清中和试验等。常规的检测方法存在费时费力、灵敏度低等缺点，而且大部分检测方法不能有效地鉴别HP-PRRSV和NADC30-like毒株， RT-PCR技术虽然能鉴别HP-PRRSV和NADC30-like毒株，但荧光定量RT-PCR检测方法的出现，比普通RT-PCR方法的灵敏性更强、特异性更好、污染几率小，高通量等优势。而且Taqman 探针法荧光定量RT-PCR技术检测出现的假阳性低、结果准确可靠，适用于临床猪群中 HP-PRRSV和NADC30-like毒株的鉴别检测。

发明内容

本发明的目的是提供用于一种鉴别HP-PRRSV和NADC30-like毒株的检测引物和探针。本发明的另一个目的是提供HP-PRRSV和NADC30-like毒株的检测试剂盒及检测方法。

为了实现上述目的，本发明的技术方案是：

一种用于HP-PRRSV和NADC30-like毒株的检测引物和探针，包括用于检测HP-PRRSV 毒株的检测引物和探针以及用于检测NADC30-like毒株的检测引物和探针，其中：

用于检测HP-PRRSV毒株的检测引物和探针：

nsp2-HV-F:5′-CACCTTCCGTGAGTGCAGAG-3′(SEQ ID NO.1)；

nsp2-HV-R:5′-AATCAGTGAATGAGCCGACA-3′(SEQ ID NO.2)；

nsp2-HV-P:5′-FAM-GAGACACTGACGAGCTGCTTG-BHQ1-3′(SEQ ID NO.3)。

用于检测NADC30-like毒株的检测引物和探针：

nsp2-del-F:5′-CGAATGARCCTGTGCCTGTCCC-3′(SEQ ID NO.4)；

nsp2-del-R:5′-TTCCTTCCACCTGCTGAAGCCCAC-3′(SEQ ID NO.5)；