[发明专利]一种抗虫蛋白Cry1C的胶体金免疫层析速测卡

说明书

本发明公开了属于生物基因技术领域的一种抗虫蛋白Cry1C的胶体金免疫层析速测卡。所述速测卡包括卡壳和卡壳内的试纸条，卡壳上设有加样孔和观察窗，试纸条包括底板及粘着在底板上依次相连的样品垫、金标垫、反应膜和吸水垫，所述加样孔设于样品垫上方，所述观察窗设于反应膜上方，所述反应膜上设有检测线和质控线，所述金标垫包被抗虫蛋白Cry1C单克隆抗体‑胶体金结合物。本发明的速测卡特异性强，灵敏度高，并且操作简便、快速、准确，适用于抗虫蛋白Cry1C的现场快速检测以及安全性评价。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体涉及一种抗虫蛋白Cry1C胶体金免疫层析速测卡。

背景技术

苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis，Bt)是一种广泛存在的革兰氏阳性菌，该菌分泌的抗虫晶体蛋白是目前主要的生物农药；分泌的抗虫蛋白按照氨基酸序列相似性被分为两类：Cry和Cryδ-内毒素。其中Cry蛋白对多种有害昆虫(如鳞翅目，双翅目，鞘翅目，线虫类和原生生物等)幼虫具有毒性。Cry毒素已经被转入多种农作物使其具有抗虫性。Cry1C蛋白是Cry毒素中的一种。目前转Cry基因的农作物主要有玉米、土豆、水稻、棉花等。

转基因技术的发展与进步推动了生物学的发展。转基因食品虽然能够满足人们对产量、抗虫性等方面的要求，但同时也对人类的生活带来了一些潜在的威胁，如某些基因导入宿主之后会使食品产生毒性，转基因食物产生过敏原，使人产生抗药性，食品的营养价值发生改变等。在进行转基因食品研究开发和商业化的同时，为了对转基因食品的安全性给予综合评估，使消费者能够快速区分转基因食品与天然食品，建立合适的方法对转基因食品中转基因成分进行鉴定与检测，能够促进农业转基因生物安全管理，保障人和动物以及微生物的安全，同时能够保护生态环境，促进农业转基因生物技术的进一步研究。为了对转基因作物或者其衍生物中Cry1C蛋白进行快速的定性分析，研究开发Cry1C胶体金免疫层析速测卡具有非常大的意义。

免疫胶体金技术(Immune colloidal gold technique)是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。胶体金是由氯金酸 (HAuCL4)在还原剂如抗坏血酸、柠檬酸钠等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。胶体金标记技术是免疫层析快速诊断的核心技术，它以胶体金作为示踪标记物应用于抗原抗体反应，其实质是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗虫蛋白Cry1C的胶体金免疫层析速测卡，从而应用于抗虫蛋白Cry1C的现场快速检测以及安全性评价。

为实现上述目的，本发明提供了一种抗虫蛋白Cry1C胶体金免疫层析速测卡，包括卡壳和卡壳内的试纸条，卡壳上设有加样孔和观察窗，试纸条包括底板及粘着在底板上依次相连的样品垫、金标垫、反应膜和吸水垫，所述加样孔设于样品垫上方，所述观察窗设于反应膜上方，所述反应膜上设有检测线和质控线，所述金标垫包被抗虫蛋白Cry1C单克隆抗体-胶体金结合物。

上述抗虫蛋白Cry1C胶体金免疫层析速测卡在另一种实施方式中，抗虫蛋白Cry1C单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.16697的Cry1C单抗杂交瘤细胞株(PA1-1707016/3H31D2)分泌得到。

上述抗虫蛋白Cry1C胶体金免疫层析速测卡在另一种实施方式中，反应膜上所述反应膜上的检测线包被抗虫蛋白Cry1C单克隆抗体，质控线包被羊抗鼠IgG。