[发明专利]杂交瘤细胞株及其应用有效
| 申请号： | 201811607394.1 | 申请日： | 2018-12-27 |
| 公开（公告）号： | CN109777785B | 公开（公告）日： | 2021-05-04 |
| 发明（设计）人： | 刘卫晓;金芜军;黄卫红;张哲;王迪 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N5/20 | 分类号： | C12N5/20;C07K16/12;G01N33/577;G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京知汇林知识产权代理事务所(普通合伙) 11794 | 代理人： | 董涛 |
| 地址： | 100044 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 杂交瘤 细胞株 及其 应用 | ||
1.杂交瘤细胞株，其特征在于，生物保藏编号为CGMCC No.16697的杂交瘤细胞株3H31D2、生物保藏编号为CGMCC No.16698的杂交瘤细胞株5E10 1C6；所述杂交瘤细胞株的制备方法包括以下步骤：
a)通过原核表达得到Cry1C重组蛋白；
b)免疫动物：将Cry1C重组蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠；
c)细胞融合：收集免疫BALB/c小鼠的脾细胞并与SP2/0细胞进行融合；
d)细胞建株：通过有限稀释法进行亚克隆，亚克隆5-7天进行ELISA检测，直至筛选出稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株进行扩大再培养和保存；
所述小鼠脾细胞与SP2/0细胞的融合比例为1:(5-10)；
所述杂交瘤细胞株3H3 1D2以及杂交瘤细胞株5E10 1C6所产生的单克隆抗体通过间接ELISA检测所得到的效价分别为1:1025000和1:1280000。
2.权利要求1所述杂交瘤细胞株3H3 1D2所产生的单克隆抗体、杂交瘤细胞株5E10 1C6所产生的单克隆抗体。
3.根据权利要求2所述的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的类型均为IgG2b。
4.权利要求2所述单克隆抗体，其特征在于，将杂交瘤细胞株接种到小鼠腹腔中制备腹水，然后进行Protein A-琼脂糖亲和层析柱纯化，得到所述单克隆抗体。
5.权利要求2-4任一项所述单克隆抗体在检测Cry1C抗虫蛋白中的应用。
6.根据权利要求5所述单克隆抗体在检测Cry1C抗虫蛋白中的应用，其特征在于，所述单克隆抗体在制备ELISA法检测Cry1C抗虫蛋白的试剂中的应用。
7.根据权利要求5所述单克隆抗体在检测Cry1C抗虫蛋白中的应用，其特征在于，所述单克隆抗体在制备ELISA双抗体夹心法检测Cry1C抗虫蛋白的试剂中的应用。
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