[发明专利]杂交瘤细胞株及其应用

说明书

本发明公开了属于生物工程技术领域的杂交瘤细胞株及其应用。杂交瘤细胞株3H3 1D2的物保藏编号为CGMCC No.16697、杂交瘤细胞株5E10 1C6的物保藏编号为CGMCC No.16698。本发明还公开了杂交瘤细胞株3H3 1D2和杂交瘤细胞株5E10 1C6所产生的单克隆抗体。所述单克隆抗体间接ELISA效价分别为1:1025000和1:1280000，抗体亚型均为IgG2b，所述单抗可以特异识别原核表达的重组Cry1C蛋白及转基因水稻中的内源Cry1C蛋白，为实现抗虫蛋白Cry1C在转基因水稻中的定性、定量检测奠定基础。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体涉及到杂交瘤细胞株及其应用。

背景技术

苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis，Bt)是一种广泛存在的革兰氏阳性菌，该菌分泌的抗虫晶体蛋白是目前主要的生物农药；分泌的抗虫蛋白按照氨基酸序列相似性被分为两类：Cry和Cryδ-内毒素。其中Cry蛋白对多种有害昆虫(如鳞翅目，双翅目，鞘翅目，线虫类和原生生物等)幼虫具有毒性。Cry毒素已经被转入农作物使其具有抗虫性。Cry1C蛋白是Cry毒素中的一种。目前转Cry基因的农作物主要有玉米、土豆、水稻、棉花等。

转基因技术的发展与进步推动了生物学的发展。转基因食品虽然能够满足人们对产量、抗虫性等方面的要求，但同时也对人类的生活带来了一些潜在的威胁，如某些基因导入宿主之后会使食品产生毒性，转基因食物产生过敏原，使人产生抗药性，食品的营养价值发生改变等。在进行转基因食品研究开发和商业化的同时，为了对转基因食品的安全性给予综合评估，使消费者能够快速区分转基因食品与天然食品，建立合适的方法对转基因食品中转基因成分进行鉴定与检测，能够促进农业转基因生物安全管理，保障人和动物以及微生物的安全，同时能够保护生态环境，促进农业转基因生物技术的进一步研究。为了对转基因水稻或者其衍生物中Cry1C蛋白进行快速的定量或定性分析，研究并得到抗Cry1C蛋白的单克隆抗体具有非常大的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供Cry1C单抗杂交瘤细胞株(PA1-1707016/3H3 1D2)和Cry1C单抗杂交瘤细胞株(PA1-1707016/5E10 1C6)，其分泌的单克隆抗体为实现抗虫蛋白Cry1C在转基因水稻中的定性、定量检测奠定基础。

本发明提供的Cry1C单抗杂交瘤细胞株(PA1-1707016/3H3 1D2)的生物保藏编号为CGMCC No.16697，所述Cry1C单抗杂交瘤细胞株 (PA1-1707016/5E10 1C6)的生物保藏编号为CGMCC No.16698。

上述杂交瘤细胞株的制备方法，包括以下步骤：

a)通过原核表达得到Cry1C重组蛋白；

b)免疫动物：将Cry1C重组蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠；

c)细胞融合：收集免疫BALB/c小鼠的脾细胞并与SP2/0细胞进行融合；

d)细胞建株：通过有限稀释法进行亚克隆，亚克隆5-7天进行ELISA检测，直至筛选出稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株进行扩大再培养和保存。

上述制备方法在另一种实施方式中，小鼠的脾细胞与SP2/0细胞的融合比例为1:(5-10)。

本发明还提供了所述Cry1C单抗杂交瘤细胞株(PA1-1707016/3H3 1D2) 所产生的单克隆抗体、Cry1C单抗杂交瘤细胞株(PA1-1707016/5E10 1C6)所产生的单克隆抗体。

上述单克隆抗体在另一种实施方式中，Cry1C单抗杂交瘤细胞株 (PA1-1707016/3H3 1D2)以及Cry1C单抗杂交瘤细胞株(PA1-1707016/5E10 1C6)所产生的单克隆抗体的类型均为IgG2b。